Sanger测序 - 版本历史

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2025-08-23T08:35:53Z

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第96行：		第96行：

	该技术操作简便，成本低廉，适合在基层医院推广，可以用于对肿瘤切除术后患者的血中游离DNA进行监测，提供预后信息。		该技术操作简便，成本低廉，适合在基层医院推广，可以用于对肿瘤切除术后患者的血中游离DNA进行监测，提供预后信息。

			{{学科分类}}

			[[Category:生物化学]]

2025年8月23日 (六) 07:57 Magezeya

2025-08-23T07:57:32Z

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第1行：		第1行：
	Sanger测序即双脱氧链终止法、一代测序技术。		Sanger测序即双脱氧链终止法、一代测序技术。
			[[Category:生物化学]]
	在HGP中被广泛使用。		在HGP中被广泛使用。

2025年1月24日 (五) 06:35 恐龙王子

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第29行：		第29行：
	通过调节dNTP和ddNTP的相对浓度，可以控制链终止的位置和频率。		通过调节dNTP和ddNTP的相对浓度，可以控制链终止的位置和频率。

	=== ~~凝胶电泳~~ ===		=== 电泳 ===
	~~使用高分辨率变性丙烯酰胺凝胶电泳将不同长度的DNA片段分开。~~		通过电泳将不同长度的DNA片段分开。

	~~凝胶电泳有四个泳道，每个泳道对应一种碱基（A、G、C、T）。~~		一般有四个泳道，每个泳道对应一种碱基（A、G、C、T）。

	电泳结束后，通过放射自显影或紫外显影读取凝胶影像，确定每个片段的终止位置。		电泳结束后，通过放射自显影或紫外显影读取凝胶影像，确定每个片段的终止位置。
第41行：		第41行：

	=== 乙型肝炎病毒耐药基因突变检测 ===		=== 乙型肝炎病毒耐药基因突变检测 ===
	~~一项研究使用Sanger测序法对215例乙型肝炎病毒（HBV）DNA拷贝数大于10^3的患者血清进行测序。~~		一项研究使用Sanger测序法对215例乙型肝炎病毒（HBV）DNA拷贝数大于1k的患者血清进行测序。

	结果显示，40例（18.6%）患者检测到耐药基因突变，其中21例（9.77%）具有对应参考价值。<nowiki><cite>2</cite></nowiki>		结果显示，40例（18.6%）患者检测到耐药基因突变，其中21例（9.77%）具有对应参考价值。<nowiki><cite>2</cite></nowiki>
第51行：		第51行：

	检测成功率高达98.04%，敏感度和特异度分别为92.50%和99.52%。		检测成功率高达98.04%，敏感度和特异度分别为92.50%和99.52%。

	~~研究表明，Sanger测序法可以有效地检测CDA基因突变，为临床用药提供参考。~~

	=== 胶质瘤IDH突变检测 ===		=== 胶质瘤IDH突变检测 ===
第65行：		第63行：

	研究选择了GJB2基因的第二个外显子、SLC26A4基因的p8和p18两个外显子、mtDNA的两个常见突变位点进行测序。		研究选择了GJB2基因的第二个外显子、SLC26A4基因的p8和p18两个外显子、mtDNA的两个常见突变位点进行测序。

	~~结果显示，Sanger测序法可以成功检测这些基因的突变，为临床诊断提供依据。~~

	== 优势和局限性 ==		== 优势和局限性 ==

2025年1月24日 (五) 00:28 恐龙王子

2025-01-24T00:28:37Z

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第1行：		第1行：
	~~Sanger测序即双脱氧链终止法，是一代测序技术在HGP中被广泛使用。~~		Sanger测序即双脱氧链终止法、一代测序技术。

	~~基本原理~~		在HGP中被广泛使用。

			== 基本原理 ==
	Sanger测序基于DNA复制的原理，通过在DNA合成过程中引入链终止剂来实现测序。		Sanger测序基于DNA复制的原理，通过在DNA合成过程中引入链终止剂来实现测序。

第10行：		第11行：
	* 向体系中加入不同类型的ddNTP（ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP），使得DNA链在A、G、C、T位点分别终止，形成一系列不同长度的DNA片段。		* 向体系中加入不同类型的ddNTP（ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP），使得DNA链在A、G、C、T位点分别终止，形成一系列不同长度的DNA片段。

	反应过程		== 反应过程 ==

	构建反应系统		=== 构建反应系统 ===
			每个反应体系包含四种dNTP，用于正常DNA合成。

	~~- 每个反应体系包含四种dNTP，用于正常DNA合成。~~		每个反应体系加入一种特定的ddNTP，使其在特定碱基处终止DNA链。

	~~- 每个反应体系加入一种特定的ddNTP，使其在特定碱基处终止DNA链。~~		为了方便定位，ddNTP通常会被荧光或同位素标记。

	~~- 为了方便定位，ddNTP通常会被荧光或同位素标记。~~		反应体系还包括目标DNA片段、DNA聚合酶和引物。

	- 反应体系还包括目标DNA片段、DNA聚合酶和引物。

	~~扩增目的片段~~

			=== 扩增目的片段 ===
	以目标DNA片段为模板，在DNA聚合酶的催化下，从引物处开始复制DNA。		以目标DNA片段为模板，在DNA聚合酶的催化下，从引物处开始复制DNA。

第30行：		第29行：
	通过调节dNTP和ddNTP的相对浓度，可以控制链终止的位置和频率。		通过调节dNTP和ddNTP的相对浓度，可以控制链终止的位置和频率。

	凝胶电泳		=== 凝胶电泳 ===

	使用高分辨率变性丙烯酰胺凝胶电泳将不同长度的DNA片段分开。		使用高分辨率变性丙烯酰胺凝胶电泳将不同长度的DNA片段分开。

第40行：		第38行：
	从凝胶底部到顶部读出新合成链的序列，从而推知待测模板链的序列。		从凝胶底部到顶部读出新合成链的序列，从而推知待测模板链的序列。

	应用实例		== 应用实例 ==

	~~乙型肝炎病毒耐药基因突变检测~~

			=== 乙型肝炎病毒耐药基因突变检测 ===
	一项研究使用Sanger测序法对215例乙型肝炎病毒（HBV）DNA拷贝数大于10^3的患者血清进行测序。		一项研究使用Sanger测序法对215例乙型肝炎病毒（HBV）DNA拷贝数大于10^3的患者血清进行测序。

第50行：		第47行：
	研究还发现，LAM药物（拉米夫定）的耐药发生率较高，为9.77%。		研究还发现，LAM药物（拉米夫定）的耐药发生率较高，为9.77%。

	肺癌吉西他滨化疗耐药敏感基因CDA检测		=== 肺癌吉西他滨化疗耐药敏感基因CDA检测 ===

	一项研究使用Sanger测序法检测255例晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的CDA基因突变情况。		一项研究使用Sanger测序法检测255例晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的CDA基因突变情况。

第58行：		第54行：
	研究表明，Sanger测序法可以有效地检测CDA基因突变，为临床用药提供参考。		研究表明，Sanger测序法可以有效地检测CDA基因突变，为临床用药提供参考。

	胶质瘤IDH突变检测		=== 胶质瘤IDH突变检测 ===

	一项研究使用Sanger测序法检测660例胶质瘤样本中的IDH1和IDH2基因突变。		一项研究使用Sanger测序法检测660例胶质瘤样本中的IDH1和IDH2基因突变。

第66行：		第61行：
	IDH1基因突变主要集中在132位氨基酸，最常见的突变类型是IDH1R132H，占总突变的94%。		IDH1基因突变主要集中在132位氨基酸，最常见的突变类型是IDH1R132H，占总突变的94%。

	感音神经性聋患者常见聋病基因检测		=== 感音神经性聋患者常见聋病基因检测 ===

	一项研究使用Sanger测序法检测GJB2、SLC26A4和mtDNA基因的突变情况。		一项研究使用Sanger测序法检测GJB2、SLC26A4和mtDNA基因的突变情况。

第74行：		第68行：
	结果显示，Sanger测序法可以成功检测这些基因的突变，为临床诊断提供依据。		结果显示，Sanger测序法可以成功检测这些基因的突变，为临床诊断提供依据。

	优势和局限性		== 优势和局限性 ==

	优势

			=== 优势 ===
	高准确性: Sanger测序法的准确率非常高，通常在99.99%左右。		高准确性: Sanger测序法的准确率非常高，通常在99.99%左右。

第84行：		第77行：
	广泛使用：由于其可靠性和准确性，Sanger测序法在许多小型项目和验证性研究中仍然广泛应用。		广泛使用：由于其可靠性和准确性，Sanger测序法在许多小型项目和验证性研究中仍然广泛应用。

	局限性		=== 局限性 ===

	成本较高：对于大规模、自动化基因组分析，Sanger测序的成本较高。		成本较高：对于大规模、自动化基因组分析，Sanger测序的成本较高。

第92行：		第84行：
	灵敏度限制: Sanger测序法的灵敏度一般要求突变细胞占总标本的15%以上，这限制了其在某些低突变频率样本中的应用。		灵敏度限制: Sanger测序法的灵敏度一般要求突变细胞占总标本的15%以上，这限制了其在某些低突变频率样本中的应用。

	与其他技术的比较		== 与其他技术的比较 ==

	~~焦磷酸测序法~~

			=== 焦磷酸测序法 ===
	焦磷酸测序法是一种基于焦磷酸释放的测序技术，与Sanger测序法相比，焦磷酸测序法在某些情况下可以提供更高的灵敏度。		焦磷酸测序法是一种基于焦磷酸释放的测序技术，与Sanger测序法相比，焦磷酸测序法在某些情况下可以提供更高的灵敏度。

	例如，一项研究比较了焦磷酸测序法和Sanger测序法在检测CYP2C19*17基因多态性中的应用，结果显示焦磷酸测序法的检出率更高。		例如，一项研究比较了焦磷酸测序法和Sanger测序法在检测CYP2C19*17基因多态性中的应用，结果显示焦磷酸测序法的检出率更高。

	ADx-ARMS法		=== ADx-ARMS法 ===

	ADx-ARMS法是将ARMS和双环探针实时PCR技术相结合的一种新技术，具有高灵敏度和无需开盖操作的特点。		ADx-ARMS法是将ARMS和双环探针实时PCR技术相结合的一种新技术，具有高灵敏度和无需开盖操作的特点。

	一项研究比较了ADx-ARMS法和PCR-Sanger测序法在检测非小细胞肺癌微小标本EGFR基因突变中的应用，结果显示ADx-ARMS法的总突变检出率显著高于Sanger测序法（51.0% vs 25.3%）。		一项研究比较了ADx-ARMS法和PCR-Sanger测序法在检测非小细胞肺癌微小标本EGFR基因突变中的应用，结果显示ADx-ARMS法的总突变检出率显著高于Sanger测序法（51.0% vs 25.3%）。

	蓝白斑筛选联合Sanger测序技术		=== 蓝白斑筛选联合Sanger测序技术 ===

	通过蓝白斑筛选技术可以提高Sanger测序法的灵敏度，达到千分之一的水平。		通过蓝白斑筛选技术可以提高Sanger测序法的灵敏度，达到千分之一的水平。

	该技术操作简便，成本低廉，适合在基层医院推广，可以用于对肿瘤切除术后患者的血中游离DNA进行监测，提供预后信息。		该技术操作简便，成本低廉，适合在基层医院推广，可以用于对肿瘤切除术后患者的血中游离DNA进行监测，提供预后信息。

2025年1月24日 (五) 00:25 恐龙王子

2025-01-24T00:25:20Z

显示更改

恐龙王子：创建页面，内容为“Sanger测序，也称为双脱氧链终止法，是一种广泛使用的DNA测序技术。这项技术由英国生物化学家弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）于1977年发明，并因其高准确性和可靠性，成为基因检测的金标准。以下是对Sanger测序的详细介绍： - 基本原理Sanger测序基于DNA复制的原理，通过在DNA合成过程中引入链终止剂来实现测序。 - 测序反应体系中包括目标DNA片…”

2025-01-24T00:13:52Z

创建页面，内容为“Sanger测序，也称为双脱氧链终止法，是一种广泛使用的DNA测序技术。这项技术由英国生物化学家弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）于1977年发明，并因其高准确性和可靠性，成为基因检测的金标准。以下是对Sanger测序的详细介绍： - **基本原理**Sanger测序基于DNA复制的原理，通过在DNA合成过程中引入链终止剂来实现测序。 - 测序反应体系中包括目标DNA片…”

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Sanger测序，也称为双脱氧链终止法，是一种广泛使用的DNA测序技术。这项技术由英国生物化学家弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）于1977年发明，并因其高准确性和可靠性，成为基因检测的金标准。以下是对Sanger测序的详细介绍：

- **基本原理**Sanger测序基于DNA复制的原理，通过在DNA合成过程中引入链终止剂来实现测序。 - 测序反应体系中包括目标DNA片段、脱氧三磷酸核苷酸（dNTP）、双脱氧三磷酸核苷酸（ddNTP）、测序引物和DNA聚合酶。

- ddNTP由于缺少3'-OH基团，无法与下一个dNTP形成磷酸二酯键，导致DNA链在特定位置终止。

- 每个反应体系中加入不同类型的ddNTP（ddATP、ddGTP、ddCTP、ddTTP），使得DNA链在A、G、C、T位点分别终止，形成一系列不同长度的DNA片段。

- **反应过程**

- **构建反应系统**

- 每个反应体系包含四种dNTP，用于正常DNA合成。<nowiki><cite>5</cite></nowiki>

- 每个反应体系加入一种特定的ddNTP，使其在特定碱基处终止DNA链。

- 为了方便定位，ddNTP通常会被荧光或同位素标记。

- 反应体系还包括目标DNA片段、DNA聚合酶和引物。

- **扩增目的片段**以目标DNA片段为模板，在DNA聚合酶的催化下，从引物处开始复制DNA。

- 当遇到ddNTP时，反应停止，产生一系列具有共同起始点但不同终止点的DNA片段。

- 通过调节dNTP和ddNTP的相对浓度，可以控制链终止的位置和频率。

- **凝胶电泳**

- 使用高分辨率变性丙烯酰胺凝胶电泳将不同长度的DNA片段分开。

- 凝胶电泳有四个泳道，每个泳道对应一种碱基（A、G、C、T）。<nowiki><cite>5</cite></nowiki>

- 电泳结束后，通过放射自显影或紫外显影读取凝胶影像，确定每个片段的终止位置。

- 从凝胶底部到顶部读出新合成链的序列，从而推知待测模板链的序列。

- **应用实例**

- **乙型肝炎病毒耐药基因突变检测**

- 一项研究使用Sanger测序法对215例乙型肝炎病毒（HBV）DNA拷贝数大于10^3的患者血清进行测序。

- 结果显示，40例（18.6%）患者检测到耐药基因突变，其中21例（9.77%）具有对应参考价值。<nowiki><cite>2</cite></nowiki>

- 研究还发现，LAM药物（拉米夫定）的耐药发生率较高，为9.77%。

- **肺癌吉西他滨化疗耐药敏感基因CDA检测**

- 一项研究使用Sanger测序法检测255例晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的CDA基因突变情况。

- 检测成功率高达98.04%，敏感度和特异度分别为92.50%和99.52%。

- 研究表明，Sanger测序法可以有效地检测CDA基因突变，为临床用药提供参考。

- **胶质瘤IDH突变检测**

- 一项研究使用Sanger测序法检测660例胶质瘤样本中的IDH1和IDH2基因突变。

- 结果显示，237例（35.9%）样本检测到IDH1基因突变，9例（1.4%）样本检测到IDH2基因突变。

- IDH1基因突变主要集中在132位氨基酸，最常见的突变类型是IDH1R132H，占总突变的94%。

- **感音神经性聋患者常见聋病基因检测**

- 一项研究使用Sanger测序法检测GJB2、SLC26A4和mtDNA基因的突变情况。

- 研究选择了GJB2基因的第二个外显子、SLC26A4基因的p8和p18两个外显子、mtDNA的两个常见突变位点进行测序。

- 结果显示，Sanger测序法可以成功检测这些基因的突变，为临床诊断提供依据。

- **优势和局限性**

- **优势**

- **高准确性**: Sanger测序法的准确率非常高，通常在99.99%左右。

- **长读长**: 可以产生超过500个核苷酸的读长，适用于较长的DNA片段测序。

- **广泛使用**: 由于其可靠性和准确性，Sanger测序法在许多小型项目和验证性研究中仍然广泛应用。

- **局限性**

- **成本较高**: 对于大规模、自动化基因组分析，Sanger测序的成本较高。

- **通量较低**: 相比于下一代测序技术（如Illumina），Sanger测序的通量较低，不适合处理大量样本。

- **灵敏度限制**: Sanger测序法的灵敏度一般要求突变细胞占总标本的15%以上，这限制了其在某些低突变频率样本中的应用。

- **与其他技术的比较**

- **焦磷酸测序法**

- 焦磷酸测序法是一种基于焦磷酸释放的测序技术，与Sanger测序法相比，焦磷酸测序法在某些情况下可以提供更高的灵敏度。

- 例如，一项研究比较了焦磷酸测序法和Sanger测序法在检测CYP2C19*17基因多态性中的应用，结果显示焦磷酸测序法的检出率更高。

- **ADx-ARMS法**

- ADx-ARMS法是将ARMS和双环探针实时PCR技术相结合的一种新技术，具有高灵敏度和无需开盖操作的特点。

- 一项研究比较了ADx-ARMS法和PCR-Sanger测序法在检测非小细胞肺癌微小标本EGFR基因突变中的应用，结果显示ADx-ARMS法的总突变检出率显著高于Sanger测序法（51.0% vs 25.3%）。

- **蓝白斑筛选联合Sanger测序技术**

- 通过蓝白斑筛选技术可以提高Sanger测序法的灵敏度，达到千分之一的水平。

- 该技术操作简便，成本低廉，适合在基层医院推广，可以用于对肿瘤切除术后患者的血中游离DNA进行监测，提供预后信息。

Sanger测序 - 版本历史

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2025年8月23日 (六) 07:57 Magezeya

2025年1月24日 (五) 06:35 恐龙王子

2025年1月24日 (五) 00:28 恐龙王子

2025年1月24日 (五) 00:25 恐龙王子

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