Western blot条带结果分析整理 - 版本历史

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2025-08-23T08:27:52Z

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第166行：		第166行：
	<ref>[https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/41165994]Western Blot 原理、protocol--及条带常见问题分析.与你畅游世界</ref>		<ref>[https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/41165994]Western Blot 原理、protocol--及条带常见问题分析.与你畅游世界</ref>
	<references />		<references />

			{{学科分类}}

			[[Category:生物技术]]

2020年6月3日 (三) 11:05 毛蕊花糖

2020-06-03T11:05:44Z

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第10行：		第10行：
	* 一抗浓度过低（小小的细微条带）。		* 一抗浓度过低（小小的细微条带）。
	* ECL发光液失效（小小的细微条带）。<br>		* ECL发光液失效（小小的细微条带）。<br>
	[[文件:Wb 3.PNG\|缩略图]]		[[文件:Wb 3.PNG\|缩略图\|无结果1]]
	[[文件:Wb 2.PNG\|缩略图]]		[[文件:Wb 2.PNG\|缩略图\|无结果2]]
	[[文件:Wb 1.PNG\|缩略图]]		[[文件:Wb 1.PNG\|缩略图\|无结果3]]
	解决方案：		解决方案：
	* 如果使用湿转法，则需增加转移时间。		* 如果使用湿转法，则需增加转移时间。
第44行：		第44行：
	* 避免对同一印迹膜进行多次重复再杂交。		* 避免对同一印迹膜进行多次重复再杂交。
	* 蛋白质未转移→优化目标蛋白转移效率。		* 蛋白质未转移→优化目标蛋白转移效率。

	== 高背景 ==		== 高背景 ==
	目的条带单一清晰，但其他地方弥漫着连续性的单一背景。是WB最常见的问题之一，注意操作规范，不偷工减料，洗膜按照规定来5min×5次或者10min×3次，不要改成5min×3次，或者10min×2次。<br>		目的条带单一清晰，但其他地方弥漫着连续性的单一背景。是WB最常见的问题之一，注意操作规范，不偷工减料，洗膜按照规定来5min×5次或者10min×3次，不要改成5min×3次，或者10min×2次。<br>
第51行：		第50行：
	* 一抗浓度过高导致出现了非特异性结合。		* 一抗浓度过高导致出现了非特异性结合。
	* 洗膜的时间及次数不足导致未洗脱游离抗体。		* 洗膜的时间及次数不足导致未洗脱游离抗体。

	== 出现异常的多个条带 ==		== 出现异常的多个条带 ==
	[[文件:Wb 4.PNG\|缩略图]][[文件:Wb 5.PNG\|缩略图]]		[[文件:Wb 4.PNG\|缩略图\|多条带1]][[文件:Wb 5.PNG\|缩略图\|多条带2]]
	出现原因：		出现原因：
	* 可能是一抗与杂蛋白出现了非特异性结合。		* 可能是一抗与杂蛋白出现了非特异性结合。
第79行：		第77行：
	操作注意：<br>		操作注意：<br>
	我们常常将电转液倒入一个盘子里，倒入的液体不能太多也不能太少，最好的高度是与放上第一层滤纸齐平，然后往滤纸上浇点转膜液，把电泳胶用清水清洗下，将电泳胶平铺到滤纸上，仔细检查滤纸与胶之间是否有气泡，可以左右前后观察，不同方向观察之后确认无气泡，然后再往胶上面浇点电转液，用两只手的拇指和食指轻轻夹住PVDF膜的两侧中间，使膜成U型，然后将U型的底部接触胶的中间，慢慢往两边放下膜，这样一般气泡很少。然后上层滤纸同样用U型的放置方法，用玻璃棒稍微贴实下，然后盖上海绵。注意不要来回赶气泡，这样反而会带入气泡。		我们常常将电转液倒入一个盘子里，倒入的液体不能太多也不能太少，最好的高度是与放上第一层滤纸齐平，然后往滤纸上浇点转膜液，把电泳胶用清水清洗下，将电泳胶平铺到滤纸上，仔细检查滤纸与胶之间是否有气泡，可以左右前后观察，不同方向观察之后确认无气泡，然后再往胶上面浇点电转液，用两只手的拇指和食指轻轻夹住PVDF膜的两侧中间，使膜成U型，然后将U型的底部接触胶的中间，慢慢往两边放下膜，这样一般气泡很少。然后上层滤纸同样用U型的放置方法，用玻璃棒稍微贴实下，然后盖上海绵。注意不要来回赶气泡，这样反而会带入气泡。

	== 条带中出现浅色 ==		== 条带中出现浅色 ==
	中心部位高浓度的辣根过氧化物酶（HRP）等消耗底物过快，使得胶片曝光时底物已消耗殆尽。解决方法是降低蛋白量，降低一抗和二抗浓度，加快X光片定影。		中心部位高浓度的辣根过氧化物酶（HRP）等消耗底物过快，使得胶片曝光时底物已消耗殆尽。解决方法是降低蛋白量，降低一抗和二抗浓度，加快X光片定影。
第87行：		第84行：
	* 抗体聚合。		* 抗体聚合。
	* 缓冲液污染。		* 缓冲液污染。
	* 一抗与膜某些地方非特异性结合。 <br>[[文件:Wb 6.PNG\|缩略图]]		* 一抗与膜某些地方非特异性结合。 <br>[[文件:Wb 6.PNG\|缩略图\|黑点和黑斑]]
	解决方案：		解决方案：
	* 将印迹膜表面残留的丙烯酰胺凝胶碎片移除。		* 将印迹膜表面残留的丙烯酰胺凝胶碎片移除。
第96行：		第93行：
	* 使用新的缓冲液或使用0.2μm的过滤器过滤缓冲液。		* 使用新的缓冲液或使用0.2μm的过滤器过滤缓冲液。
	* 封闭牛奶一定要纯，封闭结束之后要洗，如果没有完全溶解的情况下加牛奶倒膜上，会导致很多不溶性颗粒附着在膜上，这就会导致发光时候膜上的黑点。		* 封闭牛奶一定要纯，封闭结束之后要洗，如果没有完全溶解的情况下加牛奶倒膜上，会导致很多不溶性颗粒附着在膜上，这就会导致发光时候膜上的黑点。

	== 条带拖尾 ==		== 条带拖尾 ==
	蛋白量过大，一抗的浓度过大，加入的时间过长，洗一抗和洗二抗不要凑活，一定要5min×5次。样品溶解度不佳。		蛋白量过大，一抗的浓度过大，加入的时间过长，洗一抗和洗二抗不要凑活，一定要5min×5次。样品溶解度不佳。

	== 出现重影 ==		== 出现重影 ==
	荧光强度较高，压片曝光时，胶片放好后又移动了一段距离。不要瞎动，放歪了也不要调整。（有的时候出现重新刚好在上下位置，并且重影会相对弱一些，不要误以为抗体识别了该蛋白的另外一种异构形式。）		荧光强度较高，压片曝光时，胶片放好后又移动了一段距离。不要瞎动，放歪了也不要调整。（有的时候出现重新刚好在上下位置，并且重影会相对弱一些，不要误以为抗体识别了该蛋白的另外一种异构形式。）

	== 出现非均一性背景 ==		== 出现非均一性背景 ==
	可能的原因是膜干了失水皱缩，所以多加点水。		可能的原因是膜干了失水皱缩，所以多加点水。
	== 某个条带变形 ==		== 某个条带变形 ==
	PAGE胶中可能存在气泡或不溶性颗粒，故配胶时要小心，使用无杂质液体。制作“三明治”时也要压紧。更换陈年老用的海绵垫。		PAGE胶中可能存在气泡或不溶性颗粒，故配胶时要小心，使用无杂质液体。制作“三明治”时也要压紧。更换陈年老用的海绵垫。

	== 条带哑铃型 ==		== 条带哑铃型 ==
	更换更高品质的PAGE胶。		更换更高品质的PAGE胶。
	== 最边缘的条带弯曲 ==		== 最边缘的条带弯曲 ==
	~~电泳电流不均一，可换用新的电泳槽，不使用两边的泳道。找电工修修你家的变压器。~~		电泳电流不均一，可换用新的电泳槽，不使用两边的泳道。

	== 蛋白质分子量过高或过低 ==		== 蛋白质分子量过高或过低 ==
	出现原因：		出现原因：
第124行：		第116行：
	蛋白质降解，下方产生的模糊不清的小条带是其碎片。提取蛋白的时候PMSF（苯甲基磺酰氟，蛋白酶抑制剂）多加点。		蛋白质降解，下方产生的模糊不清的小条带是其碎片。提取蛋白的时候PMSF（苯甲基磺酰氟，蛋白酶抑制剂）多加点。
	== 条带“╰╯”笑脸状（U 形状） ==		== 条带“╰╯”笑脸状（U 形状） ==
	凝胶冷却不均一，电泳槽老化，在上样的时候没有吹打干净、跑胶电压过大造成拖尾。 [[文件:Wb 9.PNG\|缩略图]]		凝胶冷却不均一，电泳槽老化，在上样的时候没有吹打干净、跑胶电压过大造成拖尾。 [[文件:Wb 9.PNG\|缩略图\|笑脸]]
	== 条带“╭╮”哭脸状 ==		== 条带“╭╮”哭脸状 ==
	凝胶的左右两头没有固定好。		凝胶的左右两头没有固定好。
第136行：		第128行：
	缓冲液pH不正确，或者SDS加的太少。		缓冲液pH不正确，或者SDS加的太少。
	== 边缘效应 ==		== 边缘效应 ==
	出现于胶图的两端最靠边的条带，会发现跑出来的带不是水平直线。<br> [[文件:Wb 10.PNG\|缩略图]]		出现于胶图的两端最靠边的条带，会发现跑出来的带不是水平直线。<br> [[文件:Wb 12.PNG\|缩略图\|边缘效应]]
	解决方案：<br>宁可将Loading buffer加到两边也不要将样品加到两边。		解决方案：<br>宁可将Loading buffer加到两边也不要将样品加到两边。
	== 脏……全屏条带 ==		== 脏……全屏条带 ==
第146行：		第138行：
	* 曝光时间过长。		* 曝光时间过长。
	* 印迹过程中印迹膜变干。		* 印迹过程中印迹膜变干。
	* 缓冲液重复利用导致污染。		* 缓冲液重复利用导致污染。<br>
	* 所有条带连成一片没有间隔，上样量过多，样品弥散<br>		解决方案：<br>[[文件:Wb 11.PNG\|缩略图\|全屏黑]]
	解决方案：<br>[[文件:Wb 11.PNG\|缩略图]]
	* 稀释一抗和/或二抗浓度。		* 稀释一抗和/或二抗浓度。
	* 提高封闭剂浓度，如3~5% 的牛血清蛋白、酪蛋白、脱脂牛奶.		* 提高封闭剂浓度，如3~5% 的牛血清蛋白、酪蛋白、脱脂牛奶.
第160行：		第151行：
	* 确保印迹膜保持湿润，覆盖有足够液体以防止其变干。		* 确保印迹膜保持湿润，覆盖有足够液体以防止其变干。
	* 使用新制缓冲液。		* 使用新制缓冲液。

	== 脏……区域性黑屏 ==		== 脏……区域性黑屏 ==
	出现原因：		出现原因：
第167行：		第157行：
	* 洗涤缓冲液与某些印迹区域接触不足。		* 洗涤缓冲液与某些印迹区域接触不足。
	* 印迹膜污染。<br>		* 印迹膜污染。<br>
	解决方案：[[文件:Wb 12.PNG\|缩略图]]		解决方案：[[文件:Wb 10.PNG\|缩略图\|局域黑]]
	* 确保印迹膜保持湿润，一直覆盖有足够液体以防止其变干。		* 确保印迹膜保持湿润，一直覆盖有足够液体以防止其变干。
	* 增加洗涤缓冲液用量。		* 增加洗涤缓冲液用量。
第175行：		第165行：
	<ref>本文档由拟态章鱼编写，由恺凌、Eric校对审核。</ref>		<ref>本文档由拟态章鱼编写，由恺凌、Eric校对审核。</ref>
	<ref>[https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/41165994]Western Blot 原理、protocol--及条带常见问题分析.与你畅游世界</ref>		<ref>[https://www.dxy.cn/bbs/newweb/pc/post/41165994]Western Blot 原理、protocol--及条带常见问题分析.与你畅游世界</ref>
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2020年6月3日 (三) 11:01 毛蕊花糖

2020-06-03T11:01:05Z

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第10行：		第10行：
	* 一抗浓度过低（小小的细微条带）。		* 一抗浓度过低（小小的细微条带）。
	* ECL发光液失效（小小的细微条带）。<br>		* ECL发光液失效（小小的细微条带）。<br>
			[[文件:Wb 3.PNG\|缩略图]]
			[[文件:Wb 2.PNG\|缩略图]]
			[[文件:Wb 1.PNG\|缩略图]]
	解决方案：		解决方案：
	* 如果使用湿转法，则需增加转移时间。		* 如果使用湿转法，则需增加转移时间。
第50行：		第53行：

	== 出现异常的多个条带 ==		== 出现异常的多个条带 ==
			[[文件:Wb 4.PNG\|缩略图]][[文件:Wb 5.PNG\|缩略图]]
	出现原因：		出现原因：
	* 可能是一抗与杂蛋白出现了非特异性结合。		* 可能是一抗与杂蛋白出现了非特异性结合。
第67行：		第71行：
	== 条带中出现圆圈 ==		== 条带中出现圆圈 ==
	出现的原因是电转时PAGE胶与尼龙膜之间存在气泡。出现气泡的原因基本上是在转膜过程中转移“三明治”组装不恰当。<br>		出现的原因是电转时PAGE胶与尼龙膜之间存在气泡。出现气泡的原因基本上是在转膜过程中转移“三明治”组装不恰当。<br>
	解决方法：		[[文件:Wb 7.PNG\|缩略图\|半干法]][[文件:Wb 8.PNG\|缩略图\|湿法]]解决方法：
	* 在组装转移“三明治”的时候使用更多的转印缓冲液。		* 在组装转移“三明治”的时候使用更多的转印缓冲液。
	* 确保在组装“三明治”的时候移除凝胶和印迹膜之间所有的气泡。		* 确保在组装“三明治”的时候移除凝胶和印迹膜之间所有的气泡。
第83行：		第87行：
	* 抗体聚合。		* 抗体聚合。
	* 缓冲液污染。		* 缓冲液污染。
	* 一抗与膜某些地方非特异性结合。 <br>		* 一抗与膜某些地方非特异性结合。 <br>[[文件:Wb 6.PNG\|缩略图]]
	解决方案：		解决方案：
	* 将印迹膜表面残留的丙烯酰胺凝胶碎片移除。		* 将印迹膜表面残留的丙烯酰胺凝胶碎片移除。
第120行：		第124行：
	蛋白质降解，下方产生的模糊不清的小条带是其碎片。提取蛋白的时候PMSF（苯甲基磺酰氟，蛋白酶抑制剂）多加点。		蛋白质降解，下方产生的模糊不清的小条带是其碎片。提取蛋白的时候PMSF（苯甲基磺酰氟，蛋白酶抑制剂）多加点。
	== 条带“╰╯”笑脸状（U 形状） ==		== 条带“╰╯”笑脸状（U 形状） ==
	凝胶冷却不均一，电泳槽老化，在上样的时候没有吹打干净、跑胶电压过大造成拖尾。		凝胶冷却不均一，电泳槽老化，在上样的时候没有吹打干净、跑胶电压过大造成拖尾。 [[文件:Wb 9.PNG\|缩略图]]
	== 条带“╭╮”哭脸状 ==		== 条带“╭╮”哭脸状 ==
	凝胶的左右两头没有固定好。		凝胶的左右两头没有固定好。
第132行：		第136行：
	缓冲液pH不正确，或者SDS加的太少。		缓冲液pH不正确，或者SDS加的太少。
	== 边缘效应 ==		== 边缘效应 ==
	出现于胶图的两端最靠边的条带，会发现跑出来的带不是水平直线。<br>		出现于胶图的两端最靠边的条带，会发现跑出来的带不是水平直线。<br> [[文件:Wb 10.PNG\|缩略图]]
	解决方案：<br>宁可将Loading buffer加到两边也不要将样品加到两边。		解决方案：<br>宁可将Loading buffer加到两边也不要将样品加到两边。
	== 脏……全屏条带 ==		== 脏……全屏条带 ==
第144行：		第148行：
	* 缓冲液重复利用导致污染。		* 缓冲液重复利用导致污染。
	* 所有条带连成一片没有间隔，上样量过多，样品弥散<br>		* 所有条带连成一片没有间隔，上样量过多，样品弥散<br>
	解决方案：<br>		解决方案：<br>[[文件:Wb 11.PNG\|缩略图]]
	* 稀释一抗和/或二抗浓度。		* 稀释一抗和/或二抗浓度。
	* 提高封闭剂浓度，如3~5% 的牛血清蛋白、酪蛋白、脱脂牛奶.		* 提高封闭剂浓度，如3~5% 的牛血清蛋白、酪蛋白、脱脂牛奶.
第163行：		第167行：
	* 洗涤缓冲液与某些印迹区域接触不足。		* 洗涤缓冲液与某些印迹区域接触不足。
	* 印迹膜污染。<br>		* 印迹膜污染。<br>
	解决方案：		解决方案：[[文件:Wb 12.PNG\|缩略图]]
	* 确保印迹膜保持湿润，一直覆盖有足够液体以防止其变干。		* 确保印迹膜保持湿润，一直覆盖有足够液体以防止其变干。
	* 增加洗涤缓冲液用量。		* 增加洗涤缓冲液用量。

毛蕊花糖：/* 未检测到任何结果 */

2020-06-03T10:45:57Z

未检测到任何结果

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:45的版本
第9行：		第9行：
	* 蛋白上样量太少（小小的细微条带）。		* 蛋白上样量太少（小小的细微条带）。
	* 一抗浓度过低（小小的细微条带）。		* 一抗浓度过低（小小的细微条带）。
	* ECL发光液失效（小小的细微条带）。		* ECL发光液失效（小小的细微条带）。<br>
	<br>
	解决方案：		解决方案：
	* 如果使用湿转法，则需增加转移时间。		* 如果使用湿转法，则需增加转移时间。

毛蕊花糖：/* 脏……全屏条带 */

2020-06-03T10:44:56Z

脏……全屏条带

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:44的版本
第143行：		第143行：
	* 曝光时间过长。		* 曝光时间过长。
	* 印迹过程中印迹膜变干。		* 印迹过程中印迹膜变干。
	* 缓冲液重复利用导致污染。 <br>		* 缓冲液重复利用导致污染。
			* 所有条带连成一片没有间隔，上样量过多，样品弥散<br>
	解决方案：<br>		解决方案：<br>
	* 稀释一抗和/或二抗浓度。		* 稀释一抗和/或二抗浓度。
第155行：		第156行：
	* 减少成像曝光时间。		* 减少成像曝光时间。
	* 确保印迹膜保持湿润，覆盖有足够液体以防止其变干。		* 确保印迹膜保持湿润，覆盖有足够液体以防止其变干。
	* 使用新制缓冲液。		* 使用新制缓冲液。

	== 脏……区域性黑屏 ==		== 脏……区域性黑屏 ==
	出现原因：		出现原因：

毛蕊花糖：/* 最边缘的条带弯曲 */

2020-06-03T10:41:40Z

最边缘的条带弯曲

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:41的版本
第108行：		第108行：
	更换更高品质的PAGE胶。		更换更高品质的PAGE胶。
	== 最边缘的条带弯曲 ==		== 最边缘的条带弯曲 ==
	~~电泳电流不均一，可换用新的电泳槽，不使用两边的泳道~~		电泳电流不均一，可换用新的电泳槽，不使用两边的泳道。找电工修修你家的变压器。

	== 蛋白质分子量过高或过低 ==		== 蛋白质分子量过高或过低 ==

毛蕊花糖：/* 最边缘的条带弯曲 */

2020-06-03T10:40:48Z

最边缘的条带弯曲

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:40的版本
第108行：		第108行：
	更换更高品质的PAGE胶。		更换更高品质的PAGE胶。
	== 最边缘的条带弯曲 ==		== 最边缘的条带弯曲 ==
	~~电泳电流不均一，可换用新的电泳槽，也可不使用两边的泳道~~		电泳电流不均一，可换用新的电泳槽，不使用两边的泳道

	== 蛋白质分子量过高或过低 ==		== 蛋白质分子量过高或过低 ==
	出现原因：		出现原因：

毛蕊花糖：/* 某个条带变形 */

2020-06-03T10:39:45Z

某个条带变形

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:39的版本
第103行：		第103行：
	可能的原因是膜干了失水皱缩，所以多加点水。		可能的原因是膜干了失水皱缩，所以多加点水。
	== 某个条带变形 ==		== 某个条带变形 ==
	~~PAGE胶中可能存在气泡或不溶性颗粒，故配胶时要小心，使用无杂质液体。制作“三明治”时也要压紧。~~		PAGE胶中可能存在气泡或不溶性颗粒，故配胶时要小心，使用无杂质液体。制作“三明治”时也要压紧。更换陈年老用的海绵垫。

	== 条带哑铃型 ==		== 条带哑铃型 ==
	更换更高品质的PAGE胶。		更换更高品质的PAGE胶。

毛蕊花糖：/* 出现重影 */

2020-06-03T10:38:39Z

出现重影

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:38的版本
第98行：		第98行：

	== 出现重影 ==		== 出现重影 ==
	~~荧光强度较高，压片曝光时，胶片放好后又移动了一段距离。不要瞎动，放歪了也不要调整。~~		荧光强度较高，压片曝光时，胶片放好后又移动了一段距离。不要瞎动，放歪了也不要调整。（有的时候出现重新刚好在上下位置，并且重影会相对弱一些，不要误以为抗体识别了该蛋白的另外一种异构形式。）

	== 出现非均一性背景 ==		== 出现非均一性背景 ==
	可能的原因是膜干了失水皱缩，所以多加点水。		可能的原因是膜干了失水皱缩，所以多加点水。

毛蕊花糖：/* 高背景 */

2020-06-03T10:37:52Z

高背景

←上一版本		2020年6月3日 (三) 18:37的版本
第44行：		第44行：

	== 高背景 ==		== 高背景 ==
	目的条带单一清晰，但其他地方弥漫着连续性的单一背景。是WB最常见的问题之一，注意操作规范，不偷工减料，洗膜按照规定来5min5次或者10min3次，不要改成5min3次，或者10min2次。<br>		目的条带单一清晰，但其他地方弥漫着连续性的单一背景。是WB最常见的问题之一，注意操作规范，不偷工减料，洗膜按照规定来5min×5次或者10min×3次，不要改成5min×3次，或者10min×2次。<br>
	出现原因：		出现原因：
	* 为封闭不完善（脱脂牛奶多加点）。		* 为封闭不完善（脱脂牛奶多加点）。

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2020年6月3日 (三) 11:05 毛蕊花糖

2020年6月3日 (三) 11:01 毛蕊花糖

毛蕊花糖：​/* 未检测到任何结果 */

毛蕊花糖：​/* 脏……全屏条带 */

毛蕊花糖：​/* 最边缘的条带弯曲 */

毛蕊花糖：​/* 最边缘的条带弯曲 */

毛蕊花糖：​/* 某个条带变形 */

毛蕊花糖：​/* 出现重影 */

毛蕊花糖：​/* 高背景 */

Sofia：自动添加 Sofia 模板和分类

毛蕊花糖：/* 未检测到任何结果 */

毛蕊花糖：/* 脏……全屏条带 */

毛蕊花糖：/* 最边缘的条带弯曲 */

毛蕊花糖：/* 最边缘的条带弯曲 */

毛蕊花糖：/* 某个条带变形 */

毛蕊花糖：/* 出现重影 */

毛蕊花糖：/* 高背景 */