报告基因整理

报告基因是用于筛选和指示转化的细胞、组织的有效标记，有时也可作为目的基因，应为显性基因，非转化者不能生存，对自身发育等无伤害，易得到，无抗性。

植物报告基因

npt 新霉素磷酸转移酶基因

来自转座子Tn5，对卡那霉素、G418、巴龙霉素、新霉素有抗性，其中卡那霉素抗性基因（kan^r）或新霉素抗性基因（NPT II）为第一个使用并现在常用的标记基因，

aph IV 潮霉素磷酸转移酶基因

来自大肠杆菌，对潮霉素抗性，在禾谷类的选择效率比新霉素高，对人无食品安全问题（因为潮霉素只用于兽医临床）。

aacc3和aacc4 庆大霉素-3-N-乙酰转移酶基因

对庆大霉素有抗性。

ble 博来霉素抗性基因

来源于Tn5，对博来霉素有抗性。

荧光素酶基因

荧光素酶一般催化萤光素 +ATP→ 萤光素化腺苷酸（luciferyl adenylate） +PPi

萤光素化腺苷酸 +O2→ 氧萤光素 +AMP+ 光

反应光产物具有最高的量子效率

GFP基因

绿色荧光蛋白基因

pEGFP-N1载体为真核细胞表达载体，具有这方面的优点。

绿色荧光蛋白基因来源于Jellyfish Aequorea Victoria， 是Shimomura等于1962年发现的蛋白质，由238个氨基酸组成，分子量约为27Kd。GFP在包括热、极端PH和化学变性剂等苛刻条件下都很稳定，用甲醛固定后会持续发出荧光，但在还原环境下荧光会很快熄灭。

与以往常用的报告基因相比，GFP具有以下优点：

①在荧光显微镜下，用波长约490 nm的紫外线激发后，即可观察到绿色荧光，直接、简捷、便于检测；

②无需任何的作用底物或共作用物,检测的灵敏度不受反应效率的影响，保证了极高的检出率；

③蛋白本身性质稳定；

④可在多种异源生物中表达且无细胞毒性；

⑤其基因片段长度较小(约717 bp)，易于构建融合蛋白，且融合蛋白仍能保持荧光激发活性，为研究其他基因表达产物的分布提供了方便。

pEGFP是一种优化的突变型GFP，使其产生的荧光较普通GFP强35倍，大大增强了其报告基因的敏感度。pEGFP与其他蛋白的融合表达已有很多成功的例子，而且其N及C端均可融合，并不影响其发光。

pEGFP-N1载体上携带有EGFP蛋白表达基因，如上图质粒图谱所示。

①从结构上看，该质粒具有很强的复制能力，可以满足随宿主细胞分裂时跟随胞质遗传给新生的子细胞，这是保证目的基因稳定表达的因素之一；

②含有高效的功能强大的启动子SV40和PCMV，可以使目的基因在增殖的细胞中稳定表达；

③具有多克隆位点，便于目的基因的插入；

④该载体具有neo基因，可以采用G418来筛选已成功转染了该载体的靶细胞。

这些特殊的结构可以实现目的基因在靶细胞内的稳定表达。