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CRISPR-Cas系统及相关技术
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=== 先导编辑Primer Editing === 使用的RNA称为pegRNA,包含①和目标序列互补配对的序列②和目标序列大致相同但存在一些突变的序列。 将Cas9n与一个逆转录酶融合,Cas9n只能将DNA进行单链断裂,产生一个切口,融合的RT则'''有可能'''以pegRNA上②序列为模板,以切开的末端为引物,进行逆转录。(也可能直接就解离了,不进行逆转录) 此时目标序列对面就有了两条互补序列,一条是原本的互补序列,一条是以②序列为模板合成的、与原本互补序列相比存在突变的一条互补序列,二者以翼式存在。 当翼式结构被修复时,有可能将原本的互补序列切除,留下突变的互补序列,这在突变处产生错配。(也可能突变的互补序列被切除了,留下原有的互补序列) 当错配被修复时,有可能是修复为突变型,因此这个基因就被定向编辑为pegRNA上设计的序列。(也可能被修复为野生型) 优点:不产生双链断裂 缺点:效率太低(有很多“可能”) [[文件:Primer Editing.png|830x830像素]]
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