跳转到内容
主菜单
主菜单
移至侧栏
隐藏
导航
首页
最近更改
随机页面
MediaWiki帮助
特殊页面
osm&bio
搜索
搜索
外观
创建账号
登录
个人工具
创建账号
登录
查看“︁生化分子细胞技术列表”︁的源代码
页面
讨论
大陆简体
阅读
查看源代码
查看历史
工具
工具
移至侧栏
隐藏
操作
阅读
查看源代码
查看历史
常规
链入页面
相关更改
页面信息
外观
移至侧栏
隐藏
←
生化分子细胞技术列表
因为以下原因,您没有权限编辑该页面:
您请求的操作仅限属于该用户组的用户执行:
用户
您可以查看和复制此页面的源代码。
* [[常见分子克隆元件功能]] * [[NET-seq]] * '''[[染色质构象捕获]]''' ** 3C ** 4C ** 5C ** Hi-C ** ChIP-loop ** ChIA-PET * '''蛋白质-蛋白质互作''' ** Y2H酵母双杂交 ** CoIP免疫共沉淀 ** pull down下拉实验 ** FERT荧光共振能量转移 ** BiFC双分子荧光互补 ** SPR表面等离子共振 ** ITC等温滴定量热法 * '''[[荧光相关技术]]''' ** FRAP ** FLIP ** FLAP ** FRET ** FLIM * '''蛋白质-RNA互作''' ** RIP-RNA结合蛋白免疫共沉淀:甲醛交联,裂解细胞,抗体沉淀特定蛋白,去交联获得RNA。 ** RNA pull down:标记的诱饵RNA与细胞裂解物孵育;检测与诱饵RNA结合的蛋白。也可以已知蛋白找核酸。 ** MeRIP-RNA甲基化免疫沉淀:用甲基化RNA特异抗体沉淀并检测结合蛋白 * '''[[染色质开放性检测技术|染色质开放性检测]]''' ** [[染色质开放性检测技术|MNase-seq]] ** [[染色质开放性检测技术|FAIRE-seq]] ** [[染色质开放性检测技术|DNase-seq]] ** [[染色质开放性检测技术|ATAC-seq]] * '''各种印记''' ** western blotting:蛋白质,但也可以检测翻译后修饰。 ** northern blotting:检测RNA,探针是什么无所谓。 ** southern blotting:检测DNA,探针无所谓。 ** eastern blotting:二维电泳蛋白质,检测修饰,用的较少。 ** dot blotting :不经电泳 ** Southwestern blotting:DNA探针检测蛋白质电泳结果 ** Far-western blotting:不用抗体而用可能互作的蛋白 ** northwestern blotting:RNA探针检测蛋白质电泳结果 ** middle eastern:DNA检测RNA ** far western:检测脂质 * '''层析/色谱技术''' ** 凝胶过滤层析 ** 亲和层析 *** IMAC ** 聚焦层析:固定相上有缓冲剂,酸性的层析液流过,从上到下被缓冲,形成ph梯度;蛋白质会在进入等电点以上的pH后吸附在层析柱上;随着层析液不断流入,层析柱缓冲能力被逐渐耗竭,pH梯度移动(原来某一pH的位置下移),不同的蛋白就随等电点相应的梯度流出。 ** 离子交换层析 ** 疏水层析 ** 反向层析 * '''克隆某特定基因的办法''' ** 功能克隆:已知基因产物(蛋白质),获得编码序列 ** 定位克隆:已知基因位置,染色体步移 ** 序列克隆:已知基因部分序列,获得全部序列 ** 表型克隆: * '''基因克隆的具体技术''' ** 鸟枪克隆法:将基因组打成片段,转入受体,寻找相关表型变化 ** 消减杂交:将两份cDNA混合,去除双链,剩余的可能是与表型差异有关的序列。 ** 转座子标签:转座子插入使得基因突变,在有相关表型改变的个体中寻找转座子,就能找到被突变的基因。 ** 图位克隆:染色体步移 * '''PCR万世同堂''' ** 一代PCR ** 二代PCR:实时荧光定量PCR(real-time PCR/qPCR) ** 三代PCR:微滴PCR(dPCR),常用数字微滴PCR(ddPCR) ** 特种PCR: *** 易错PCR:可以应用于DNA序列的人工进化和SELEX等; *** 原位PCR:即将FISH和PCR结合,在组织内部''in situ'' PCR; *** 热启动PCR:目的简要概述为减少非特异性扩增,实现方法诸如发夹引物、琼脂包埋、抗体失活等等; *** 重叠PCR(overlap PCR):采用跨模板片段作为引物扩增,运用了第一次的扩增产物作为长引物进行二次扩增; *** 定点诱变PCR:可以大致分成两代:第一代是运用诱变引物在质粒上直接引入点突变,并且在筛选过程中运用了DpnI这一IV型酶,缺点是由于质粒比较大,扩增效率不高,而且筛选过程略微麻烦一点;第二代是运用线性片段和两组引物先分别进行扩增,再运用类似于overlap PCR的方法,利用长引物扩增得到目的片段; *** 多突变PCR:有DNA洗牌技术和随机启动重组,主要是获得依托答辩一样序列混乱的DNA; *** 不对称PCR:某一向引物比另一向多,扩增产物的量不对等,主要是获取探针和长引物; *** 反向PCR:很简单了,其中有一个引伸技术质粒获救; *** 反转录PCR:原理简单,引出来了一堆子技术如SMART、RACE、锚定PCR; *** 巢式PCR:在克隆里面就叫染色体步移了,原理没甚区别,但讲起来费劲,不赘述; *** TAIL-PCR:又称热不对称交错PCR,貌似除了朱玉贤院士的《现代分子生物学》没见谁讲过,有兴趣可参阅,原理复杂,不赘述;其实Yang Sir的分子生物学(第二版)的P564也讲了,不过较为简略,可供参考(Yang Sir的原理上e44-1也有,不过全文字比较抽象,但给了一堆总结,不错) *** cDNA差异分析:类似于运用PCR对两个不同样本的基因表达多少进行粗略比较,一个样本加引物的接头,一个不加,混合样本后进行扩增,线性扩增则量一致,指数则前大于后,扩增缓慢则后大于前,当然定量精确度差,应用实例较少。 * '''基因工程'''(genetic engineering) ** 基因打靶 *** 胸苷激酶和新霉素抗性 *** 条件性敲除:Cre-loxP、Flp-FRT ** 基因编辑 *** 巨核酸酶 *** ZFN锌指核酸酶 *** TALEN类转录活化因子核酸酶 *** [[CRISPER-Cas9及相关|CRISPR-Cas9及相关]] **** prime-editing引物编辑 **** dCas9 **** Cas9n *电泳 **'''[[脉冲场凝胶电泳]]''' **二维琼脂糖凝胶电泳 **非变性电泳native page ***blue native page ***clear native page ***quantitative preparative native continuous(QPNC-PAGE)
该页面嵌入的页面:
模板:学科分类
(
查看源代码
)
返回
生化分子细胞技术列表
。
搜索
搜索
查看“︁生化分子细胞技术列表”︁的源代码
添加话题