用户:Yanjiecao10086/沿阶草的碎片化基础本

 这里是沿阶草，此页面只是一些常用零碎基础知识的汇总，旨在让刚入门的友友快速知道常用知识，苟分。

生物技术

1、核酸提取处理时加入EDTA是为了螯合金属阳离子抑制酶活性，SDS也可以使酶变性进行酶处理。

2、DNA提取时酚作为去垢剂

3、RNA处理时不会溶于有机相

4、葡萄糖在DNA处理时加入是为了增加粘度避免DNA机械损伤（RNA柔性所以不需要）

5、电泳中maker只能与同构型条带对比（如环状对环状，线性对线性）

6、Trizol中氯仿作为萃取剂可以促进分相。

7、吸附材料在高盐低ph下带负电（如硅胶）

你这莫非是用盐桥理论？个人认为氢键更靠谱一些——卡共和 您说的有道理，这里确实存在不妥

8、煮沸法分离RNA与DNA是因为两者复性时耗时不同。

9、聚丙烯酰胺多电泳蛋白，而琼脂糖则多用于DNA，前者电泳分子量小，后者分子量大。

10、缓冲液中的溴酚蓝是作为指示剂使用，用于指示电泳状态与情况。

11、不同blotting中使用变性试剂不同，如SB中用NaOH而NB则用甲醛。

12、识别不同片段却能切出相同黏性末端的酶为同尾酶。

13、随二价阳离子与限制酶浓度、ph上升，限制酶星号活性上升（保真度下降）

14、克隆与表达载体都需要基本元件（如启动、终止子）

15、外显子范围比编码区要大

16、蛋白质工程本质还是通过改变基因进行下游干预，而不是直接搞蛋白质。

17、TA克隆利用Taq酶末端自动加A（碱基）的特征来开发由T做黏性末端的载体。

18、3‘——5’外切酶切出的小片段都带有相同的活性。

19、Infusion克隆只使用Infusion酶，而其他大多要多种不同性质的酶一起。

20、钙离子诱导克隆是利用热脉冲在细胞上制造间隙，方便DNA分子进入然后重组。

21、慢病毒多用于真核细胞。

22、微滴数字PCR中的DNA分子服从泊松分布（有没有佬解释下（雾））

23、PCR时3‘端严格配对且开始需要尽量避开密码子的第三位，最后一位不可以用A。而5’端则用于引入突变与添加标记。

24、荧光PCR中的荧光阈值一般取基线标准差的10倍。

25、一代测序读序从下向上读，读出的是转录序。要模版序反向补齐即可。

26、当UMI（标识）相同时，PCR结果中同种DNA片段较多一般为PCR效率问题，若是UMI不同的同种DNA片段，则较为可能是基因初始拷贝不同。

27、SNP在基因组中分布广泛且变异广泛（天杀的之前谁和我说保守来着……）

28、等位基因异质表现现象都相同。

29、SiRNA一般为外源性，MiRNA一般为内源性，两者都可以作用于3‘——UTR。RNAi中掺入RISC的一般为正义链，因为反义链在热力学上更稳定。（求大佬解答（我貌似忘了（悲））

30、CRISPR-Cas9注意:crRNA由RNase III加工，引导Cas寻找特异位点，而Cas本身为非特异性的内切酶。

31、G-250与蛋白质碱性基团结合。R-250比G-250更灵敏，但其有本底吸收。G-250多用于蛋白质定量。R-250为蓝色，G-250为绿色。

32、层析中固定相一般为极性，而流动相为非极性。——还有反相层析和疏水层析呢，这个结论没啥意义，最多适用于光合色素的层析

33、Input可以用于证明实验步骤无误，IP用于证明物质有相互作用。

34、速率-区带离心介质常用蔗糖与甘油。

35、平衡密度梯度离心只依赖于密度。

细胞生物学

1、显微的最高分辨率都是0.2，单位依次递减随技术水平上升（但现在许多光学显微镜都可以绕开阿贝极限了）

2、人体双倍体基因组全长约为6.2*109bp

3、原核生物细胞大小一般为0.5-5微米，而原生生物一般为10-100微米

4、大部分古菌细胞壁仅有s层，少数含有假肽聚糖。（注意）

5、古菌有操纵子，几乎无内含子，多顺反子。（不要低估古菌的多样性，这玩意基本什么都有）

6、分歧杆菌都是革兰氏阳性，在抗酸染色时，不含分歧菌酸的才会被染成蓝色。

7、几乎所有光学显微镜都可以观察活细胞。（好像是常识）

8、流式细胞术中前向角散射光强与细胞大小正相关，而斜向角与细胞粒度与复杂性相关。（某二字机构说流式细胞术的标记不在细胞上而在细胞鞘液上这点国内教材貌似没有准确说明）

9、一般题目的Ssc-Fsc图像从上向下看分别是中性粒细胞、单核细胞、淋巴细胞。

10、单克隆抗体的特异性强而效价低，多克隆抗体特异性弱效价高。（为什么特异性弱效价会高？求解）

11、HAT筛选出来的细胞不可以直接做单抗，但其是做单抗最关键的一步。

12、酵母单杂交测的是蛋白质与核酸相互作用，酵母双杂交测的是蛋白质与蛋白质相互作用，酵母三杂交测的是RNA与蛋白质相互作用。

13、ABO血型系统抗原为糖脂，MN血型系统抗原为糖蛋白。

14、带三蛋白是碳酸氢离子与氯阴离子的反向转运体。

15、内在膜蛋白都是非共价连接，外周膜蛋白可以仅靠改变ph强度与离子强度分离。

16、胆固醇在内外小叶含量分布相似，卵磷脂和鞘磷脂分布在外小叶，脑磷脂和心磷脂分布在内小叶。糖基绝大部分都在外小叶，有极个别特例。

17、高尔基体和溶酶体上都有脂筏分布。（有一种说法是膜性细胞器都有。）

18、AQP的每个亚基都单独成一个水通道。

19、钠钾泵工作：先三钠出，ASP位点磷酸化，再二钾入。

20、真核ABC家族的两个ATP结合域位于胞内，原核则位于胞外。

21、内质网是膜性细胞器，但微体无膜。

22、NSF靠分解ATP参与转运，需依赖SNAP与其受体协同作用。

23、N-乙酰葡糖胺转移酶通过在底物磷酸基上加葡糖形成M6P标记。

24、大环内酯类物质抑制由A向P转位来抑制蛋白质合成。

25、高尔基体顺面负责产生M6P标记，反面则负责识别与回收。

26、N型糖基化产生糖链较长，O型则较短。（这两玩意机制值得一看）

27、磷脂在胞质侧形成后插入PS面。

28、胰岛素与c肽同分泌，含量也相同，所以可以互作参照指标。

29、P、V、H型质子泵耗ATP，F型合成。（常识）

30、在缺乏微粒体的细胞外环境中，蛋白质合成只能产生引发序列。

31、细胞核蛋白不一定需要NLS！其可以通过其他带序列的蛋白“搭车”。

32、线粒体与叶绿体靶向的蛋白信号肽都在N端，其在进入内质网后被腔面处的酶切除。

33、霍乱毒素与百日咳都会导致cAMP持续升高，但原理不同。

34、光、粗面内质网根本差异在于酶不同。

35、线粒体内膜成分与细菌质膜相似。（应该可以算内共生证据罢）

36、过氧化物酶可以直接用分子氧作为底物，产生H2O2后产物被氧化氢酶直接分解。

37、微丝消耗ATP，微管消耗GTP，两者都可以作为内参使用。

38、支原体存在合胞带型结构。

39、受精本质为微丝组装，胞质收缩本质为细胞骨架的动态重组。

40、大型细胞器由微管介导定位。

41、自然中几乎找不到作用于中间丝的药物与沿中间丝运动的蛋白。

42、输入蛋白与底物直接结合，与Ran-GTP一起出核循环利用。

43、importinA需要与B形成复合体才能介导质向核的运输。

44、仅有少部分染色体有次缢横，rRNA主要分布在核仁纤维中心。

45、核糖体蛋白与rRNA组装完分大小亚基先后离开核。

46、染色体带型中，T带染端粒，G与Q带型相似，灯刷染色体于动物减I期卵母细胞内存在，多线染色体则存在于双翅目唾液腺中。

47、GPCR为脂锚定蛋白，Gα有双分子开关活性。

48、视觉信号通路无配体，超级化激活，cGMP降低。

49、格列卫抑制AB-L以治疗白血病。

50、胚胎干细胞并非全能。

51、山中伸弥向小鼠成纤维细胞中导入c-myc、klf4、oct4、sox2四种转录因子。

52、Caspase特异切Cys活性位点含一个Asp。

53、纤维素为自然界含量最高的有机物，木质素为第二。

54、胶原蛋白在内质网经羟基化修饰，存在大量Met羟赖氨酸，其N、C端蛋白在胞外进行切除。

55、粘着斑与半桥粒负责细胞与基质间连接，粘着带与桥粒负责细胞间的连接。

56、胞间连丝受胼胝质调节！

结构生化

1、非蛋白质氨基酸指无法直接编码蛋白质的氨基酸。

2、除Pro外，氨基酸都可以与HNO3反应。（Pro因为其亚氨基存在，在很多地方都十分特别）

3、Trp、Tyr、Phe强力吸光。（常识）

4、两个半胱氨酸连一起回形成二硫键，稳定蛋白质结构。（多用反应来解释结构有利于搞清楚知识）

5、人体内多为L型氨基酸。

6、PITC可进行自动顺位分析喵（）