离心相关总结

差速离心（differential centrifugation/differential pelleting）

低速离心→取上清中速离心→取上清高速离心

原理：不同颗粒的s不同，沉降速率不同。体系中密度均一。

• “洗”沉淀：随着大颗粒沉淀的还有接近底部的小颗粒，虽然沉降的慢，但是因为距离短，也会加入沉淀。因此将沉淀重悬，再次差速离心，重复数次即纯净。

密度梯度离心（density gradient centrifugation）/区带离心

速率区带密度梯度离心法（rate zonal density gradient centrifugation）

将样品加在预先制备的、密度变化较为平缓的介质上，进行离心。

此梯度的最大密度低于颗粒的最小密度，因此时间足够长时，所有颗粒全部沉降到底部。一段时间后就需要停止，此时较重的颗粒在下层，较轻的颗粒在上层。

梯度的作用是稳定液柱，防止对流。

为了防止颗粒真的沉降到底部，可以在底部加一层高密度的“衬垫”。

对密度相差不大，但是重量、大小差别大的颗粒分离非常有利。

时间较短，介质一般是蔗糖和甘油。

等密度梯度离心法（isopycnic centrifugation）

梯度较为陡峭：最大密度大于混合物颗粒的最大密度，最小密度小于颗粒物最小密度。

颗粒最终位置和大小、形状无关，只和密度有关。

颗粒最终停止在密度相等处，因此可以不限时间。分为以下两种：

平衡等密度梯度离心（equilibrium isopycnic gradient centrifugation）

这种方法选用的介质可以在离心力下自动形成密度梯度，且在离心力撤去后保持稳定。

将介质和分离物混合均匀加入离心管就行，非常简便。在离心力场中，微粒浮力密度小则上浮，浮力密度大则下沉。

上浮和下沉的微粒会一直延梯度液移动到与其浮力密度恰好相等的位置上，该位置也称颗粒的等密度点，

离心时样品各组分颗粒将按其密度大小分别移至等密度点形成区带，形成的区带不会因离心时间长而发生变化。

这种梯度需要的时间比较长，介质比较昂贵：氯化铯、硫酸铯、Percoll等。

预成型等密度梯度离心（preformed isopycnic gradient centrifugation）

用蔗糖、甘油、葡萄糖、聚蔗糖（Ficoll）人工制备出梯度。

连续等密度梯度：用梯度仪制备，密度变化是连续的。

阶梯密度梯度：用人手工加入一层一层的密度梯度，密度梯度是阶梯型变化的。