一些问题思考

1、溶液P1、P2、P3的作用分别是什么？P1中是否加入了RNase A？

_{见表格；加了，因为超螺旋之前没有条带（rRNA）}

2、硅基质膜为什么需要在高盐、低pH值下吸附DNA？

_{破坏水化膜/形成氢键}

3、如何将线性质粒和超螺旋质粒分离？

_电泳

4、质粒检测时，出现了一些低于开环质粒迁移率的杂带，或者条带拖尾，分析原因

_{基因组DNA污染；胶没做好/沉淀没有完全溶解}

5、如何设计实验判断质粒条带中哪个是线性质粒？

_单酶切

6、根据实验结果，判断酶切产物的条带与质粒有何不同？

7、如果每一种酶在某质粒中只有一个酶切位点，用三种酶对质粒进行充分切割后，会检测到多少条DNA片段？

_三条

8、电泳条带出现“拖尾”的现象是为什么？

_{凝胶不均匀/太快/溶解不充分}

9、去蛋白液的成分可能是什么？为什么不会洗脱DNA？

_{异丙醇溶液（加入能溶解蛋白质的变性剂，如尿素）/高浓度的异丙醇沉淀了DNA使其吸附}

10、引物设计原则

_{碱基均匀分布等等}

11、质粒化学转化_{（钙离子可以吸附膜与DNA，单链）}和电转化_{（瞬时高压，双链）}的原则

_{指数增长期}

12、质粒转化进细胞后，可采用哪些方法判断成功与否？

_{PCR、抗生筛选、蓝白斑、提质粒跑电泳}

13、质粒酶切时，体系中加入了一定浓度的BSA_{（牛血清白蛋白）}，它的作用是什么？

_{保护酶的活力（PS：加入低浓度二硫苏糖醇，保护巯基酶）}

14、利用酚/氯仿抽提质粒溶液时，离心后，氯仿处于什么位置？蛋白质处于什么位置？质粒处于什么位置？

_{下、中、上}

15、PCR反应体系的基本成分有哪些？

_{酶、四种dNTP、一对引物、镁离子、模板、缓冲液}

16、PCR反应没有产物，可能原因有哪些？

_{模板过多过少、镁离子加多}（与dNTP反应沉淀）_等

17、PCR模板过量，会产生哪些影响？

_{退火时模板随机结合、杂带}