离心相关总结

差速离心（differential centrifugation/differential pelleting）

低速离心→取上清中速离心→取上清高速离心

原理：不同颗粒的s不同，沉降速率不同。体系中密度均一。

• “洗”沉淀：随着大颗粒沉淀的还有接近底部的小颗粒，虽然沉降的慢，但是因为距离短，也会加入沉淀。因此将沉淀重悬，再次差速离心，重复数次即纯净。

密度梯度离心（density gradient centrifugation）/区带离心

速率区带密度梯度离心法（rate zonal density gradient centrifugation）

将样品加在预先制备的、密度变化较为平缓的介质上，进行离心。

此梯度的最大密度低于颗粒的最小密度，因此时间足够长时，所有颗粒全部沉降到底部。一段时间后就需要停止，此时较重的颗粒在下层，较轻的颗粒在上层。

梯度的作用是稳定液柱，防止对流。

为了防止颗粒真的沉降到底部，可以在底部加一层高密度的“衬垫”。

对密度相差不大，但是重量、大小差别大的颗粒分离非常有利。

时间较短，介质一般是蔗糖和甘油。

等密度梯度离心法（isopycnic centrifugation）

梯度较为陡峭：最大密度大于混合物颗粒的最大密度，最小密度小于颗粒物最小密度。

颗粒最终位置和大小、形状无关，只和密度有关。

颗粒最终停止在密度相等处，因此可以不限时间。分为以下两种：

平衡等密度梯度离心（equilibrium isopycnic gradient centrifugation）

这种方法选用的介质可以在离心力下自动形成密度梯度，且在离心力撤去后保持稳定。

将介质和分离物混合均匀加入离心管就行，非常简便。哈吉粒受到浮力会自己移动到密度相等的地方的。

形成这种梯度需要的时间比较长，介质比较昂贵：氯化铯、硫酸铯、Percoll等。

预成型等密度梯度离心（preformed isopycnic gradient centrifugation）

用蔗糖、甘油、葡萄糖、聚蔗糖（Ficoll）人工制备出梯度。

连续等密度梯度：用梯度仪制备，密度变化是连续的。

阶梯密度梯度：用人手工加入一层一层的密度梯度，密度梯度是阶梯型变化的。