上课去了の细菌染色整理

染色前的准备：固定

杀死细胞，使其附着在玻片上

• 火焰固定：3s
• 化学固定：95％酒精/4％甲醛（10％中性福尔马林）

最好用甲醛：螺旋体、致病菌

染细菌死活

亚甲蓝（美兰）：低浓度。0.1/0.05％

• 氧化型：蓝色。死
• 还原型：无色。活

另：可做氧气指示剂

革兰氏染色（进化上）

阳性G+

（低GC比）梭菌、乳杆菌、葡萄球菌、明串珠菌、链球菌、高温放线菌、支原体、芽胞杆菌、李斯特菌

（高GC比/放线菌）棒杆菌、丙酸杆菌、双歧杆菌、分枝杆菌、链霉菌、弗兰克氏菌、诺卡氏菌

阴性G-

假单胞菌、固氮菌、醋杆菌、埃希氏菌、志贺氏菌、沙门氏菌、耶森氏菌、肠杆菌、变形杆菌、奈瑟氏球菌、弧菌、克雷伯氏菌、发光杆菌、立克次氏体、衣原体、蓝藻、硝化菌＆亚硝化菌、嗜盐古菌、紫色光合细菌

• 支原体染色呈阴性

• 抗酸细菌染色为阳性，成分上似阴性

• 古菌革兰氏有阳性/阴性/无色，不能靠革兰氏判断进化地位

抗酸染色

• 阳性：分枝杆菌、诺卡氏菌(放线菌)、孢子虫

齐-尼染色法（Z-N法）：经典

1. 痰/脑脊液涂片→自然干燥→热固定
2. 初染：石炭酸复红（碱性复红 ），加热至冒蒸汽五分钟（勿沸腾）→水洗
3. 脱色：3%盐酸酒精直至无红色脱出→水洗
4. 复染：亚甲蓝1～2分钟→水洗→吸干

金永染色法：无须加热

区别：石炭酸复红浓度（齐-尼法3%，金永法5%）

荧光抗酸染色

金胺O/罗丹明B→UV激发呈黄绿色

芽孢染色

• 阳性：主要为G+。芽胞杆菌属、梭菌属

光学

1. 初染：孔雀石绿，加热
2. 水洗
3. 复染：番红

相差

芽孢折光性强。相差显微镜下为一亮的小圆点

荚膜染色

• 阳性：致病菌、固氮细菌
• 荚膜主要为多糖，含水量高，不耐热（热固定❌）

光学

墨汁负染 法

印度墨汁由碳颗粒和水溶性胶体组成，当其与脑脊液等标本混合后，碳颗粒会附着在标本中的非细胞成分上，而细胞成分则因未被染色而保持透明

对于隐球菌而言，其外层的荚膜多糖对墨汁有很强的排斥作用，因此在染色后，隐球菌会呈现出明显的透明圆形轮廓，而周围的墨汁则形成黑色背景，形成鲜明的对比

墨汁初染背景，结晶紫/美兰复染菌体

荚膜：菌体周围一圈透明亮圈

Anthony荚膜染色法

结晶紫初染，20%硫酸铜洗去染料

菌体紫色，荚膜浅蓝/淡紫

真菌（）

钙荧光白Calcofluor White

为非特异性、非免疫原性的荧光染料，可结合β-1,3和β-1,4多糖，即真菌细胞壁特异性的纤维素和几丁质

但不能与组织细胞结合，在荧光显微镜下可看到特定激发光下产生的蓝白色荧光