离心相关总结
差速离心(differential centrifugation/differential pelleting)
低速离心→取上清中速离心→取上清高速离心
原理:不同颗粒的s不同,沉降速率不同。体系中密度均一。
- “洗”沉淀:随着大颗粒沉淀的还有接近底部的小颗粒,虽然沉降的慢,但是因为距离短,也会加入沉淀。因此将沉淀重悬,再次差速离心,重复数次即纯净。
密度梯度离心(density gradient centrifugation)/区带离心
速率区带密度梯度离心法(rate zonal density gradient centrifugation)
将样品加在预先制备的、密度变化较为平缓的介质上,进行离心。
此梯度的最大密度低于颗粒的最小密度,因此时间足够长时,所有颗粒全部沉降到底部。一段时间后就需要停止,此时较重的颗粒在下层,较轻的颗粒在上层。
梯度的作用是稳定液柱,防止对流。
为了防止颗粒真的沉降到底部,可以在底部加一层高密度的“衬垫”。
对密度相差不大,但是重量、大小差别大的颗粒分离非常有利。
时间较短,介质一般是蔗糖和甘油。
等密度梯度离心法(isopycnic centrifugation)
梯度较为陡峭:最大密度大于混合物颗粒的最大密度,最小密度小于颗粒物最小密度。
颗粒最终位置和大小、形状无关,只和密度有关。
颗粒最终停止在密度相等处,因此可以不限时间。分为以下两种:
平衡等密度梯度离心(equilibrium isopycnic gradient centrifugation)
这种方法选用的介质可以在离心力下自动形成密度梯度,且在离心力撤去后保持稳定。
将介质和分离物混合均匀加入离心管就行,非常简便。哈吉粒受到浮力会自己移动到密度相等的地方的。
形成这种梯度需要的时间比较长,介质比较昂贵:氯化铯、硫酸铯、Percoll等。
预成型等密度梯度离心(preformed isopycnic gradient centrifugation)
用蔗糖、甘油、葡萄糖、聚蔗糖(Ficoll)人工制备出梯度。
连续等密度梯度:用梯度仪制备,密度变化是连续的。
阶梯密度梯度:用人手工加入一层一层的密度梯度,密度梯度是阶梯型变化的。