用户:Yanjiecao10086/沿阶草的碎片化基础本

 这里是沿阶草，此页面只是一些常用零碎基础知识的汇总，旨在让刚入门的友友快速知道常用知识，苟分。

生物技术

1、核酸提取处理时加入EDTA是为了螯合金属阳离子抑制酶活性，SDS也可以使酶变性进行酶处理。

2、DNA提取时酚作为去垢剂

3、RNA处理时不会溶于有机相

4、葡萄糖在DNA处理时加入是为了增加粘度避免DNA机械损伤（RNA柔性所以不需要）

5、电泳中maker只能与同构型条带对比（如环状对环状，线性对线性）

6、Trizol中氯仿作为萃取剂可以促进分相。

7、吸附材料在高盐低ph下带负电（如硅胶）

8、煮沸法分离RNA与DNA是因为两者复性时耗时不同。

9、聚丙烯酰胺多电泳蛋白，而琼脂糖则多用于DNA，前者电泳分子量小，后者分子量大。

10、缓冲液中的溴酚蓝是作为指示剂使用，用于指示电泳状态与情况。

11、不同blotting中使用变性试剂不同，如SB中用NaOH而NB则用甲醛。

12、识别不同片段却能切出相同黏性末端的酶为同尾酶。

13、随二价阳离子与限制酶浓度、ph上升，限制酶星号活性上升（保真度下降）

14、克隆与表达载体都需要基本元件（如启动、终止子）

15、外显子范围比编码区要大

16、蛋白质工程本质还是通过改变基因进行下游干预，而不是直接搞蛋白质。

17、TA克隆利用Taq酶末端自动加A（碱基）的特征来开发由T做黏性末端的载体。

18、3‘——5’外切酶切出的小片段都带有相同的活性。

19、Infusion克隆只使用Infusion酶，而其他大多要多种不同性质的酶一起。

20、钙离子诱导克隆是利用热脉冲在细胞上制造间隙，方便DNA分子进入然后重组。

21、慢病毒多用于真核细胞。

22、微滴数字PCR中的DNA分子服从泊松分布（有没有佬解释下（雾））

23、PCR时3‘端严格配对且开始需要尽量避开密码子的第三位，最后一位不可以用A。而5’端则用于引入突变与添加标记。

24、荧光PCR中的荧光阈值一般取基线标准差的10倍。

25、一代测序读序从下向上读，读出的是转录序。要模版序反向补齐即可。

26、当UMI（标识）相同时，PCR结果中同种DNA片段较多一般为PCR效率问题，若是UMI不同的同种DNA片段，则较为可能是基因初始拷贝不同。

27、SNP在基因组中分布广泛且变异广泛（天杀的之前谁和我说保守来着……）

28、等位基因异质表现现象都相同。

29、SiRNA一般为外源性，MiRNA一般为内源性，两者都可以作用于3‘——UTR。RNAi中掺入RISC的一般为正义链，因为反义链在热力学上更稳定。（求大佬解答（我貌似忘了（悲））

30、CRISPR-Cas9注意:crRNA由RNase III加工，引导Cas寻找特异位点，而Cas本身为非特异性的内切酶。

31、G-250与蛋白质碱性基团结合。R-250比G-250更灵敏，但其有本底吸收。G-250多用于蛋白质定量。R-250为蓝色，G-250为绿色。

32、层析中固定相一般为极性，而流动相为非极性。——还有反相层析和疏水层析呢，这个结论没啥意义，最多适用于光合色素的层析

33、Input可以用于证明实验步骤无误，IP用于证明物质有相互作用。

34、速率-区带离心介质常用蔗糖与甘油。

35、平衡密度梯度离心只依赖于密度。