颜色反应

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本页面主要总结生化中常见的颜色反应。

糖类相关颜色反应

Bial 试验

bial实验
bial实验

苔黑酚(甲基间苯二酚/地衣酚)、浓盐酸、氯化铁。用于鉴定戊糖。

戊糖会脱水形成糠醛,再产生蓝色或绿色的产物。

己糖可能会产生浑浊棕色、黄色或灰色的溶液,很容易与戊糖的绿色区分开来。

bial实验似乎不能区分DNA和RNA。

二苯胺

Dische 测试

二苯胺、冰醋酸、硫酸和乙醇。

加热时,DNA会产生蓝色,但RNA不产生反应。

Seliwanoff 检验

间苯二酚和浓盐酸。

seliwanoff实验

醛糖会产生淡红色,而酮糖迅速产生鲜红色。

蔗糖也会产生鲜红色。

Molisch检验

糖与α-萘酚乙醇溶液混合,向其上方加入一层浓硫酸,交界处产生红色环。

用于鉴定是否无糖(不只有糖会反应)的存在。

蒽酮检验

与Molisch检验原理类似,使用蒽酮和浓硫酸,在620nm有最大光吸收,可用于总糖定量。

Fehling试剂&Benedict试剂

斐林试剂:酒石酸钾钠、氢氧化钠、硫酸铜。

本尼迪特试剂:碳酸钠、柠檬酸钠、硫酸铜。

水浴加热,还原糖可以产生砖红色沉淀。

  • Barfoed实验:乙酸铜和乙酸,煮沸

Tollens'试剂

即银氨溶液。

  • Tollens’试剂有时指间苯三酚鉴定戊糖,这个检测方法与银氨溶液是同一个人发现的。

氨基酸相关颜色反应

米伦反应

米伦反应(Millon reaction)被用作检测蛋白质,但实质是酪氨酸参与反应。

试剂中含有亚硝酸与硝酸,以及Hg(Ⅱ)和Hg(Ⅲ)离子,主要的显色反应是汞离子的配合过程。

可以看到被硝化后提供了配位反应的基团,因此产生颜色。

坂口反应

坂口反应(Sakaguchi reaction),精氨酸的分析与测定。

胍基与α-萘酚在碱性NaBrO中发生反应,生成红色产物。

Hopkins-Cole反应

这个又叫乙醛酸反应(Glyoxylate reaction),反应过程涉及次溴酸根。

茚三酮反应

茚三酮反应(ninhydrin reaction),首先氨基酸被茚三酮氧化分解为醛、氨、CO2,弱酸下还原性茚三酮与氨和另一分子茚三酮缩合成蓝紫色物质,在570nm有吸收峰。

其中脯氨酸与羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。

与亚硝酸反应

蛋白质相关颜色反应

考马斯亮蓝法(Bradford反应)

考马斯亮蓝:游离态呈红色(吸收峰为488nm),利用芳香环与与蛋白质疏水区结合后呈亮蓝色(吸收峰为595nm)。

优点:反应灵敏,试剂简单,速率快,且不易被干扰。

缺点:线性关系不是很好。

有两种型号的考马斯亮蓝:R250和G250。

R250:可以被洗脱,可用于电泳条带染色。

G250:较R250多俩甲基,所以疏水性更强一些,结合迅速,常用于定量。

双缩脲法

福林酚法(Lowry法)