颜色反应
本页面主要总结生化中常见的颜色反应。
糖类相关颜色反应
Bial 试验


苔黑酚(甲基间苯二酚/地衣酚)、浓盐酸、氯化铁。用于鉴定戊糖。
戊糖会脱水形成糠醛,再产生蓝色或绿色的产物。
己糖可能会产生浑浊棕色、黄色或灰色的溶液,很容易与戊糖的绿色区分开来。
bial实验似乎不能区分DNA和RNA。

Dische 测试
二苯胺、冰醋酸、硫酸和乙醇。
加热时,DNA会产生蓝色,但RNA不产生反应。
Seliwanoff 检验
间苯二酚和浓盐酸。

醛糖会产生淡红色,而酮糖迅速产生鲜红色。
蔗糖也会产生鲜红色。
Molisch检验
糖与α-萘酚乙醇溶液混合,向其上方加入一层浓硫酸,交界处产生红色环。
用于鉴定是否无糖(不只有糖会反应)的存在。
蒽酮检验
与Molisch检验原理类似,使用蒽酮和浓硫酸,在620nm有最大光吸收,可用于总糖定量。
Fehling试剂&Benedict试剂
斐林试剂:酒石酸钾钠、氢氧化钠、硫酸铜。
本尼迪特试剂:碳酸钠、柠檬酸钠、硫酸铜。
水浴加热,还原糖可以产生砖红色沉淀。
- Barfoed实验:乙酸铜和乙酸,煮沸
Tollens'试剂
即银氨溶液。
- Tollens’试剂有时指间苯三酚鉴定戊糖,这个检测方法与银氨溶液是同一个人发现的。
氨基酸相关颜色反应
米伦反应
米伦反应(Millon reaction)被用作检测蛋白质,但实质是酪氨酸参与反应。
试剂中含有亚硝酸与硝酸,以及Hg(Ⅱ)和Hg(Ⅲ)离子,主要的显色反应是汞离子的配合过程。
可以看到被硝化后提供了配位反应的基团,因此产生颜色。
坂口反应
坂口反应(Sakaguchi reaction),精氨酸的分析与测定。
胍基与α-萘酚在碱性NaBrO中发生反应,生成红色产物。
Hopkins-Cole反应
这个又叫乙醛酸反应(Glyoxylate reaction),反应过程涉及次溴酸根。
茚三酮反应
茚三酮反应(ninhydrin reaction),首先氨基酸被茚三酮氧化分解为醛、氨、CO2,弱酸下还原性茚三酮与氨和另一分子茚三酮缩合成蓝紫色物质,在570nm有吸收峰。
其中脯氨酸与羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。
与亚硝酸反应
蛋白质相关颜色反应
考马斯亮蓝法(Bradford反应)
考马斯亮蓝:游离态呈红色(吸收峰为488nm),利用芳香环与与蛋白质疏水区结合后呈亮蓝色(吸收峰为595nm)。

优点:反应灵敏,试剂简单,速率快,且不易被干扰。
缺点:线性关系不是很好。
有两种型号的考马斯亮蓝:R250和G250。
R250:可以被洗脱,可用于电泳条带染色。
G250:较R250多俩甲基,所以疏水性更强一些,结合迅速,常用于定量。