CRISPER-Cas9及相关
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先导编辑Primer Editing
使用的RNA称为pegRNA,包含①和目标序列互补配对的序列②和目标序列大致相同但存在一些突变的序列。
将Cas9n与一个逆转录酶融合,Cas9n只能将DNA进行单链断裂,产生一个切口,融合的RT则有可能以pegRNA上②序列为模板,以切开的末端为引物,进行逆转录。(也可能直接就解离了,不进行逆转录)
此时目标序列对面就有了两条互补序列,一条是原本的互补序列,一条是以②序列为模板合成的、与原本互补序列相比存在突变的一条互补序列,二者以翼式存在。
当翼式结构被修复时,有可能将原本的互补序列切除,留下突变的互补序列,这在突变处产生错配。(也可能突变的互补序列被切除了,留下原有的互补序列)
当错配被修复时,有可能是修复为突变型,因此这个基因就被定向编辑为pegRNA上设计的序列。(也可能被修复为野生型)
优点:不产生双链断裂
缺点:效率太低(有很多“可能”)