MRNA的逆转录

步骤

1、在冰浴中的PCR管中加入如下混合物

总RNA	3μL
Oligo dT引物	1μL
RNase free H2O	7μL

2、轻轻混匀3~5s后，65℃水浴5min_{（使RNA二级结构打开）}，冰浴30s，离心5s

3、加入以下组分

5× Reaction buffer	4μL
RNase inhibitor（拮抗剂/抑制剂）	1μL
dNTP	2μL
AMV RT	2μL

4、轻轻混匀5s

5、PCR仪上按下列条件进行反转录反应

cDNA合成	42℃	60min
终止反应	85℃	5min（酶失活）