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=== 步骤 === 1、在冰浴中的PCR管中加入如下混合物 {| class="wikitable" |+ |总RNA |3μL |- |Oligo dT引物 |1μL |- |RNase free H<sub>2</sub>O |7μL |} 2、轻轻混匀3~5s后,65℃水浴5min<sub>(使RNA二级结构打开)</sub>,冰浴30s,离心5s 3、加入以下组分 {| class="wikitable" |+ |5× Reaction buffer |4μL |- |RNase inhibitor(拮抗剂/抑制剂) |1μL |- |dNTP |2μL |- |AMV RT |2μL |} 4、轻轻混匀5s 5、PCR仪上按下列条件进行反转录反应 {| class="wikitable" |+ |cDNA合成 |42℃ |60min |- |终止反应 |85℃ |5min(酶失活) |}
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MRNA的逆转录
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