颜色反应：修订间差异

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2025年8月23日 (六) 16:35的最新版本

本页面主要总结生化中常见的颜色反应。

糖类相关颜色反应

Bial 试验

苔黑酚（甲基间苯二酚/地衣酚）、浓盐酸、氯化铁。用于鉴定戊糖。

戊糖会脱水形成糠醛，再产生蓝色或绿色的产物。

己糖可能会产生浑浊棕色、黄色或灰色的溶液，很容易与戊糖的绿色区分开来。

bial实验似乎不能区分DNA和RNA。

间苯三酚反应

间苯三酚和浓盐酸。用于鉴定戊糖。

戊糖会和间苯三酚/浓盐酸反应生成朱红色物质，其他单糖与间苯三酚/浓盐酸生成黄色物质。

Seliwanoff 检验

间苯二酚和浓盐酸。

醛糖会产生淡红色，而酮糖迅速产生鲜红色。

蔗糖也会产生鲜红色。

Molisch检验

糖与α-萘酚乙醇溶液混合，向其上方加入一层浓硫酸，交界处产生红色环。

用于鉴定是否无糖（不只有糖会反应）的存在。

蒽酮检验

与Molisch检验原理类似，使用蒽酮和浓硫酸，糖类脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮反应后生成蓝绿色复合物，且在620nm有最大光吸收，可用于总糖定量。

Fehling试剂&Benedict试剂

斐林试剂：酒石酸钾钠、氢氧化钠、硫酸铜。

是的孩子们这就是我——Fehling

本尼迪特试剂：碳酸钠、柠檬酸钠、硫酸铜。

水浴加热，还原糖可以产生砖红色沉淀。

Barfoed实验：乙酸铜和乙酸，煮沸

Tollens'试剂

即银氨溶液。银氨配合物被醛还原为银单质。

Tollens’试剂有时指间苯三酚鉴定戊糖，这个检测方法与银氨溶液是同一个人发现的。

过碘酸雪夫(PAS)染色

PAS染色法（Periodic Acid-Schiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。

·主要用以染糖原、糖蛋白

Elson－Morgan染色

氨基己糖在碱性条件下，加热，与乙酰丙酮形成红色物质。可用于定量分析。

氨基酸相关颜色反应

米伦反应

米伦反应（Millon reaction）被用作检测蛋白质，但实质是酪氨酸参与反应。

试剂中含有亚硝酸与硝酸，以及Hg(Ⅱ)和Hg(Ⅲ)离子，主要的显色反应是汞离子的配合过程。

可以看到被硝化后提供了配位反应的基团，因此产生颜色。

产生白色沉淀，加热后变成红色

坂口反应

坂口反应（Sakaguchi reaction），精氨酸的分析与测定，可用NaOH和NaCIO。

胍基与α-萘酚在碱性NaBrO中发生反应，生成红色产物。

Hopkins-Cole反应

这个又叫乙醛酸反应（Glyoxylate reaction），反应过程涉及次溴酸根。

在蛋白溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环，凡含有吲哚基的化合物（氨基酸中的Trp）都有此反应

茚三酮反应

茚三酮反应（ninhydrin reaction），首先氨基酸被茚三酮氧化分解为醛、氨、CO₂,弱酸下还原性茚三酮与氨和另一分子茚三酮缩合成蓝紫色物质，在570nm有吸收峰。

其中脯氨酸与羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。

黄色反应

芳香族氨基酸（Tyr最为灵敏）溶液中遇到浓硝酸后，先产生白色沉淀，加热则变黄，再加碱颜色还会加深，变为橙黄色。

由于苯环被硝化，产生了硝基苯衍生物

这个反应很灵敏

有个图，可以去文件里看

蛋白质相关颜色反应

考马斯亮蓝法（Bradford反应）

考马斯亮蓝：游离态呈红色(吸收峰为488nm)，利用芳香环与与蛋白质疏水区结合后呈亮蓝色(吸收峰为595nm)。

优点:反应灵敏，试剂简单，速率快，且不易被干扰。

缺点:线性关系不是很好。

有两种型号的考马斯亮蓝:R250和G250。

R250:可以被洗脱，可用于电泳条带染色。

G250:较R250多俩甲基，所以疏水性更强一些，结合迅速，常用于定量。

双缩脲法

双缩脲试剂：0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠

当底物中含有肽键时（三肽及以上），试液中的铜与多肽(因为和双缩脲长得像)配位，配合物呈紫色，吸收峰为540nm

常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。硫酸铵不干扰此呈色反应，使其有利于对蛋白质纯化早期步骤的测定

福林酚法（Lowry法）

蛋白质与铜离子生成复合物后，其分子中的酪氨酸和色氨酸还原Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸，生成蓝色化合物（钨蓝和钼蓝的混合物）。

此反应灵敏度很高，常用来测定蛋白含量，吸收峰为750nm

最早由Folin发明，后来被Lowry改进

优点：应用广泛

缺点：专一性较差，干扰物质多（如Tris缓冲剂，蔗糖，硫酸铵，巯基化物，酚类，柠檬酸等），标准曲线的直线关系不特别严格。

BCA法

基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色物质，吸收峰在562nm

优点：抗干扰能力强，不易受一般浓度去污剂的干扰

缺点：可受螯合剂，高浓度还原剂的影响。

核酸相关颜色反应

福尔根反应

Schiff试剂：希夫试剂（又称品红亚硫酸试剂），与醛作用而不与酮作用。

样本水解完RNA后，用1mol/L HCl，使DNA碱基与脱氧核糖之间的糖苷键&磷酯键断裂，暴露醛基，与Schiff试剂反应形成紫红色化合物

甲基绿-派格宁染色法（Unna /昂纳染色法）

甲基绿：带两个单位正电荷，与dsDNA结合，使之呈绿色

派格宁（又称嗞罗红）：带一个单位正电荷，与RNA结合，使之呈红色

Dische 测试

二苯胺、冰醋酸、硫酸和乙醇。

加热时，DNA会产生蓝色，但RNA不产生反应。可用于DNA的定量。

苔黑酚与RNA

将RNA与浓盐酸和苔黑酚（3,5-二羟甲苯）与沸水浴中加热，产生绿色物质。可用于RNA的定量。

注：由于二苯胺法测DNA含量和苔黑酚法测RNA含量，本质上是检测脱氧核糖/核糖的含量，然后换算为核酸含量，故相对误差较大。

其他物质相关反应

木质素染色

试剂：间苯三酚、盐酸溶液

流程：先将材料由盐酸浸透，再加间苯三酚溶液，间苯三酚与木质素(其中松柏醛)反应发生樱红色。

学科分类表

分子与细胞生物学

• 生物化学

• 分子生物学

• 细胞生物学

• 生物技术

植物科学与微生物学

• 植物学

• 植物生理学

• 微生物学

动物科学与生态学

• 动物学

• 生理学

• 生态学

• 动物行为学

遗传与进化生物学

• 遗传学

• 演化生物学

• 生物信息学

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 本页面主要总结生化中常见的颜色反应。
+[[Category:生物化学]]
 == 糖类相关颜色反应 ==
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 bial实验似乎不能区分DNA和RNA。
-[[文件:二苯胺.png|缩略图|二苯胺]]
-=== Dische 测试 ===
+=== 间苯三酚反应 ===
-二苯胺、冰醋酸、硫酸和乙醇。
+间苯三酚和浓盐酸。用于鉴定戊糖。
-加热时，DNA会产生蓝色，但RNA不产生反应。
+戊糖会和间苯三酚/浓盐酸反应生成朱红色物质，其他单糖与间苯三酚/浓盐酸生成黄色物质。
 === Seliwanoff 检验 ===
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 糖与α-萘酚乙醇溶液混合，向其上方加入一层浓硫酸，交界处产生红色环。
-=== '''蒽酮检验''' ===
+用于鉴定是否无糖（不只有糖会反应）的存在。
-与Molisch检验原理类似，使用蒽酮和浓硫酸，在620nm有最大光吸收，可用于总糖定量。
+=== 蒽酮检验 ===
+与Molisch检验原理类似，使用蒽酮和浓硫酸，糖类脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽酮反应后生成蓝绿色复合物，且在620nm有最大光吸收，可用于总糖定量。
 === Fehling试剂&Benedict试剂 ===
 斐林试剂：酒石酸钾钠、氢氧化钠、硫酸铜。
+是的孩子们这就是我——Fehling
 本尼迪特试剂：碳酸钠、柠檬酸钠、硫酸铜。
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 === Tollens'试剂 ===
-即银氨溶液。
+即银氨溶液。银氨配合物被醛还原为银单质。
 * Tollens’试剂有时指间苯三酚鉴定戊糖，这个检测方法与银氨溶液是同一个人发现的。
+=== 过碘酸雪夫(PAS)染色 ===
+'''PAS染色法'''（'''P'''eriodic '''A'''cid-'''S'''chiff stain）在组织学上，主要用来检测组织中的糖类。过碘酸把糖类相邻两个碳上的羟基氧化成醛基，再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。
+·主要用以染糖原、糖蛋白
+=== Elson－Morgan染色 ===
+氨基己糖在碱性条件下，加热，与乙酰丙酮形成红色物质。可用于定量分析。
 == 氨基酸相关颜色反应 ==
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 可以看到被硝化后提供了配位反应的基团，因此产生颜色。
-====  '''<big>坂口反应</big>''' ====
+产生白色沉淀，加热后变成红色
-坂口反应（Sakaguchi reaction），精氨酸的分析与测定。
+=== <big>坂口反应</big> ===
+坂口反应（Sakaguchi reaction），精氨酸的分析与测定，可用NaOH和NaCIO。
 胍基与α-萘酚在碱性NaBrO中发生反应，生成红色产物。
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 这个又叫乙醛酸反应（Glyoxylate reaction），反应过程涉及次溴酸根。
-====  '''<big>茚三酮反应</big>''' ====
+在蛋白溶液中加入乙醛酸，并沿试管壁慢慢注入浓硫酸，在两液层之间就会出现紫色环，凡含有吲哚基的化合物（氨基酸中的Trp）都有此反应
+=== <big>茚三酮反应</big> ===
 茚三酮反应（ninhydrin reaction），首先氨基酸被茚三酮氧化分解为醛、氨、CO<sub>2</sub>,弱酸下还原性茚三酮与氨和另一分子茚三酮缩合成蓝紫色物质，在570nm有吸收峰。
 其中脯氨酸与羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色物质。
+=== 黄色反应 ===
+芳香族氨基酸（Tyr最为灵敏）溶液中遇到浓硝酸后，先产生白色沉淀，加热则变黄，再加碱颜色还会加深，变为橙黄色。
+由于苯环被硝化，产生了硝基苯衍生物
+这个反应很灵敏
+有个[[:文件:黄色反应.png|图]]，可以去文件里看
 == 蛋白质相关颜色反应 ==
-==== '''<big>考马斯亮蓝法（Bradford反应）</big>''' ====
+=== <small>考马斯亮蓝法（Bradford反应）</small> ===
-考马斯亮蓝:游离态呈红色(吸收峰为488nm)，利用芳香环与与蛋白质疏水区结合后呈亮蓝色(吸收峰为595nm)。
+考马斯亮蓝：游离态呈红色(吸收峰为488nm)，利用芳香环与与蛋白质疏水区结合后呈亮蓝色(吸收峰为595nm)。
 [[文件:考马斯亮蓝.png|缩略图]]
 优点:反应灵敏，试剂简单，速率快，且不易被干扰。
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 G250:较R250多俩甲基，所以疏水性更强一些，结合迅速，常用于定量。
+=== 双缩脲法 ===
+双缩脲试剂：0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠
+当底物中含有肽键时（三肽及以上），试液中的铜与多肽(因为和双缩脲长得像)配位，配合物呈紫色，吸收峰为540nm
+常用于需要快速但并不需要十分精确的测定。硫酸铵不干扰此呈色反应，使其有利于对蛋白质纯化早期步骤的测定
+=== 福林酚法（Lowry法） ===
+蛋白质与铜离子生成复合物后，其分子中的酪氨酸和色氨酸还原Folin-酚试剂中的磷钼酸及磷钨酸，生成蓝色化合物（钨蓝和钼蓝的混合物）。
+此反应灵敏度很高，常用来测定蛋白含量，吸收峰为750nm
+最早由Folin发明，后来被Lowry改进
+优点：应用广泛
+缺点：专一性较差，干扰物质多（如Tris缓冲剂，蔗糖，硫酸铵，巯基化物，酚类，柠檬酸等），标准曲线的直线关系不特别严格。
+=== BCA法 ===
+基于双缩脲原理，碱性条件下蛋白质将Cu2+还原成Cu+，BCA鳌合Cu+作为显色剂，产生蓝紫色物质，吸收峰在562nm
+优点：抗干扰能力强，不易受一般浓度去污剂的干扰
+缺点：可受螯合剂，高浓度还原剂的影响。
+== 核酸相关颜色反应 ==
+=== 福尔根反应 ===
+Schiff试剂：希夫试剂（又称品红亚硫酸试剂），与醛作用而不与酮作用。
+样本水解完RNA后，用1mol/L HCl，使DNA碱基与脱氧核糖之间的糖苷键&磷酯键断裂，暴露醛基，与Schiff试剂反应形成紫红色化合物[[文件:二苯胺.png|缩略图|二苯胺]]
+=== 甲基绿-派格宁染色法（Unna /昂纳染色法） ===
+甲基绿：带两个单位正电荷，与dsDNA结合，使之呈绿色
+派格宁（又称嗞罗红）：带一个单位正电荷，与RNA结合，使之呈红色
+=== Dische 测试 ===
+二苯胺、冰醋酸、硫酸和乙醇。
+加热时，DNA会产生蓝色，但RNA不产生反应。可用于DNA的定量。
+=== 苔黑酚与RNA ===
+将RNA与浓盐酸和苔黑酚（3,5-二羟甲苯）与沸水浴中加热，产生绿色物质。可用于RNA的定量。
+注：由于二苯胺法测DNA含量和苔黑酚法测RNA含量，本质上是检测脱氧核糖/核糖的含量，然后换算为核酸含量，故相对误差较大。
+== 其他物质相关反应 ==
+=== 木质素染色 ===
+试剂：间苯三酚、盐酸溶液
+流程：先将材料由盐酸浸透，再加间苯三酚溶液，间苯三酚与木质素(其中松柏醛)反应发生樱红色。
+{{学科分类}}
+[[Category:生物化学]]