显微技术

基本原理

• 分辨率D：D=0.61λ/N*sin(α/2)

符号	含义	单位
D	最小可分辨的两点间距离（分辨率）	nm 或 μm
λ	照明光波长(最短的可见光波长λ=400nm)	nm 或 μm
N	物镜与标本间介质的折射率	无量纲（空气=1，水≈1.33，油≈1.51~1.52）
α	物镜孔径角（最大可达140°）	度或弧度
NA=N*sin	数值孔径	无量纲

光镜最大分辨率为0.2μm（阿贝极限）

• 艾里斑和瑞利判据

衍射会让点光源的成像扩散成中心亮斑+一圈一圈的衍射环，这个中心亮斑就是Airy disk，当一个点光源的艾里斑中心恰好落在另一个点光源艾里斑的第一暗环位置时，这两个点光源刚好可以分辨。

第一暗环的r=0.61λ/NA

光学显微镜

• 相差显微镜

光波的基本属性：波长，频率（表现为颜色），振幅（表现为明暗），相位（你看不到，乌贼可以）

相差显微镜是将相位差转化为振幅差，并利用其中的相环扩大相差

适合观察活细胞而不需染色