蛋白质含量测定

紫外吸收测定蛋白质含量

近紫外(280nm)

蛋白质280nm的吸收主要取决于色氨酸和酪氨酸，少量取决于苯丙氨酸和二硫键。

百分之几的核酸就足以对280nm的吸收产生极大影响。

• A280 (1 mg/mL) = (5690nw + 1280ny + 120nc)/M
• nw、ny、nc分别是单位质量M中色氨酸、酪氨酸、半胱氨酸残疾数目。

远紫外

肽键在190nm处的吸收最强，但由于190nm处有氧气的干扰以及技术的限制，一般使用205nm。

各种侧链，包括 Trp、Phe、Tyr、His、Cys、Met 和 Arg 的侧链（按降序排列），对 A205 有贡献。

和A280相比，在不同蛋白质之间的改变很小，但缺点包括需要在远紫外条件下精确校准分光光度计。许多缓冲液和其他成分，如血红素或吡哆醛基团，在该区域吸收很强。

Lowry法测定蛋白质含量

• 复合物形成试剂：碳酸钠+硫酸铜+酒石酸钾钠，即用即配
• Folin–Ciocalteu 试剂：磷钨酸+磷钼酸
• 先加复合物形成试剂，静止十分钟，再在涡旋振荡中加Folin-Ciocalteu试剂，静止30-60分钟。
  • Folin–Ciocalteu 试剂在碱性下不稳定，但反应只在碱性条件下发生，因此涡旋振荡保证快速混匀。