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MRNA的逆转录

来自osm&bio
野狼君卡共和​（留言 | 贡献）2025年6月13日 (五) 19:22的版本 （创建页面，内容为“=== 步骤 === 1、在冰浴中的PCR管中加入如下混合物 {| class="wikitable" |+ |总RNA |3μL |- |Oligo dT引物 |1μL |- |RNase free H<sub>2</sub>O |7μL |} 2、轻轻混匀3~5s后，65℃水浴5min<sub>（使RNA二级结构打开）</sub>，冰浴30s，离心5s 3、加入以下组分 {| class="wikitable" |+ |5× Reaction buffer |4μL |- |RNase inhibitor（拮抗剂/抑制剂） |1μL |- |dNTP |2μL |- |AMV RT |2μL |} 4、轻轻混匀5s 5、PCR仪…”）
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步骤

1、在冰浴中的PCR管中加入如下混合物

总RNA 3μL
Oligo dT引物 1μL
RNase free H2O 7μL

2、轻轻混匀3~5s后，65℃水浴5min（使RNA二级结构打开），冰浴30s，离心5s

3、加入以下组分

5× Reaction buffer 4μL
RNase inhibitor（拮抗剂/抑制剂） 1μL
dNTP 2μL
AMV RT 2μL

4、轻轻混匀5s

5、PCR仪上按下列条件进行反转录反应

cDNA合成 42℃ 60min
终止反应 85℃ 5min（酶失活）
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