用户:野狼君卡共和/实验笔记本

第零模块-重要提醒

1、记录结果

记得分析（偏差、原因分析/'自卖自夸'/哪怕结果反了，因为实验与结果分开算，分析好了也能拿分）

2、96孔板

①沿着长边点样

②一个孔只需要200μL，若给的药少，得在孔中反应（混匀可以拿着96孔板在桌上轻敲）

3、实验设计（标题）

1、假设（对照、因变量、自变量）

2、设备材料

3、实验步骤

4、预期结果（模糊数据说明）

5、结论

第一模块

一、细胞学实验

一、PAS反应（高碘酸-Schiff反应）

实验原理：高碘酸将多糖中的C-C键打断，生成乙二醇，并氧化为乙二醛；乙二醛与希夫试剂（无色品红）反应，产生紫红色。

实验材料：小鼠肝脏组织，酒精，水，二甲苯，高碘酸，希夫试剂，亚硫酸水

石蜡切片过程：肝脏组织块——固定（维持其状态，4%甲醛/10%福尔马林）——梯度酒精脱水（70%-80%-90%-95%-无水乙醇）——透明（二甲苯）——浸蜡——包埋成蜡块——切片（石蜡切片机，2~4μm）——展片-捞片-烤干——///脱蜡（二甲苯）——梯度酒精复水（100%-95%-75%-纯水）——染色（PAS试剂）——梯度酒精脱水——封片（含有二甲苯的中性树胶）——晾片（2~3天）——永久切片

实验步骤（上述'///'后）：

1、从烤箱中取出切片，趁热（石蜡成液态，效率高）放入二甲苯中，静置10min。

2、用铅笔写名字（***区分正反），依次投入无水乙醇（3min）、95%乙醇（3min）、75%乙醇（3min）、清水（1min）

3、用吸水纸将组织周围的水轻轻擦干；用滴管向组织上滴加高碘酸（完全没过组织），氧化10min

4、将切片投入75%乙醇片刻（洗净高碘酸），吸干

5、滴加希夫试剂，避光静置15~30min

6、向组织上滴加亚硫酸水，漂洗（1次30秒，漂洗2~3次）

7、梯度酒精脱水：75%乙醇（2min）、95%乙醇（2min）、无水乙醇（2min），然后充分晾干

8、封片

PS：偏重亚硫酸钠+酸+碱性品红生成无色品红，再加入活性炭震荡，过滤，即可生成遇醛变红的希夫试剂。

捎带一些理论知识：

肝动脉与肝门静脉汇合通入肝静脉；肝内胆管收集肝细胞分泌的胆汁通入总胆管，后运至胆囊。

猪肝的肝小叶明显，呈现六边形；小鼠与人的则不明显。

二、福尔根反应

原理：DNA经过1mol/L的HCl水解，嘌呤碱与脱氧核糖之间的共价键被打断，露出C1的醛基，再与希夫试剂反应。（1mol/L盐酸不会氧化多糖，也不会水解RNA，避免多糖和RNA的影响）

根尖分生区1（希夫试剂染色）

根尖分生区2

材料：根尖，1mol/LHCl，希夫试剂，清水

步骤：

1、取3~5个根尖，轻轻擦干（防止盐酸稀释），放入装有1mol/L HCl

的EP管中（60度10min）

2、吸干EP管中的盐酸，加入清水漂洗3次，一次30s

3、将根尖移入希夫试剂中，避光染色15~20min

4、根尖被染为紫红色，取出根尖，用刀片切下最前端（米粒大小）

5、在载玻片上滴加一滴清水，放上根尖，盖上载玻片，用枪尖/镊子钝头轻轻敲击（均匀）

6、压片：盖上一张吸水纸，用拇指用力下压

7、镜下观察（间、前、中、末）

注意：挑根时注意要带有根尖；不要用镊子夹根尖。

三、Brachet反应

蛙心红细胞涂片（甲基绿-吡咯红染色）

酵母台盼蓝

原理：甲基绿-吡咯红为碱性染料，合成Unna试剂，其中甲基绿易与聚合程度高的DNA结合呈现蓝绿色，吡咯红（派洛宁）易与聚合程度低的RNA结合呈现红色。

亚甲基蓝酵母（死）

步骤：

1、蛙——双毁髓——打开胸腔——蛙心取血——抗凝

2、涂片：①在一个载玻片上滴上血②斜着另一个载玻片（在45度角之下）涂片③自然晾干

（注意：载玻片干净；血量适中；血滴在45度角之下；匀速）

3、固定：95%乙醇固定5分钟

4、漂洗——轻轻晾干、擦干——滴加unna染液（保持染料不干），染色15min

5、漂洗——加入丙酮，2s——晾干

6、镜检

四、细胞死活鉴定

试剂：

通透性差异：台盼蓝、伊红、苯胺黑、赤藓红、PI、EB等（死细胞着色）

代谢差异：荧光二乙/丙/丁酸酯等（活细胞着色）/亚甲基蓝（死细胞着色，活细胞会将其还原为无色状态）

二、分子实验

蛋白酶K、RNA酶A

PS：去上清时一般用移液枪，除了ELISA用倒的（防止把抗体吸下来）

Ⅰ、质粒的碱裂解提取与酶切

_{一些问题思考}

碱裂解提取（吸附柱法）

1、原理：gDNA在碱性下完全变性/质粒DNA在碱性下不完全变性；在中性条件下gDNA不复性（沉淀），质粒DNA复性（溶解），可以通过离心分离。

2、实验步骤：

①大肠杆菌LB培养液摇床过夜。

②取1.5ml菌液于EP管中，12000转速离心2min收集菌体，弃尽培养液

③在沉淀中加入250μLBuffer P1，彻底悬浮菌体（移液枪抽吸）

④加入350μLBuffer P2，立即温和颠倒离心管5~10次_{（看到沉淀消失即可）}

⑤加入350μLBuffer P3，立即温和颠倒离心管5~10次，静置2~4min

⑥平衡吸附柱CP3：向吸附柱中加入250μLBL，12000转1min，倒掉收集管中的废液

⑦12000转速离心10分钟。将上清液移入吸附柱，12000转速离心30秒，倒掉收集管中液体

⑧加入500μLBuffer DW1_（PD），9000转速离心30秒，倒掉收集管中液体

⑨加入500μLWash Solution_{（PW，去掉DW与脂）}，12000转速离心30秒，倒掉收集管中液体

⑩重复步骤8一次

十①空吸附柱于12000转速离心1分钟，弃滤液

十②将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中_{（可以开盖放置1min，使乙醇挥发），}在吸附膜中央加入50μLElution Buffer，室温静置1分钟后，离心1分钟。保存管中DNA溶液。（可以加入EDTA螯合镁离子制成TE缓冲液，避免环境中的DNase）

PS：

1、只有在抗生素压力之下才能迫使细菌保留质粒，否则都丢失了。

2、对数后期最适合进行实验或者保留'种子'。

3、硅胶在高盐低pH环境下吸附DNA，反过来释放。_{（低pH有助于氢键形成，高盐（乙酸/乙酸钠/乙醇/异丙醇）打破水化膜）}

	成分	作用	现象	注意事项
S1（P1）	Tris-HCl Glc （可能还含有RNaseA）	重悬沉淀 （LB中杂质多）	浑浊菌液	充分混匀（防止出现菌块）
S2（P2）	SDS+NaOH	1、裂解菌体 2、变性蛋白质 3、完全变性gDNA 4、不完全变性质粒DNA	菌液变澄清	1、充分混匀 2、轻柔操作（防止打断DNA）
S3（P3）	HAc+KAc的缓冲液	1、复性 2、形成K-SDS-蛋白质沉淀	大量白色沉淀	同上

质粒的酶切

一、单酶切反应管制备

质粒	10μL
10×buffer	2μL
去离子水	7μL
EcoRⅠ	1μL
总体积	20μL

二、酶切步骤

1、将酶切反应管置于37度水浴15min

2、加入100μL乙醇，混匀，静止5min

3、13000转，离心10min

4、去掉上清，风干，用8μL洗脱缓冲液EB降解

5、取8μL酶切后的质粒进行电泳检测

Ⅱ、电泳

区分：自由电泳（直接在水中）；区带电泳（在支持物中进行）

电渗现象（会导致分辨率降低，纸层析/纤维素层析电渗强，琼脂糖/PAGE电渗弱）

（PS：之所以不用琼脂粉是因为其中除了琼脂糖还含有琼脂酸，其电渗强）

1、琼脂糖凝胶电泳（溴酚蓝跑一半即可）

制备：琼脂糖+TBE（硼酸）/TAE（醋酸）/TPE（磷酸，会干扰后续实验，一般不用了）Buffer，加热后冷却成胶

缓冲液：用什么缓冲液就用什么跑胶

Roding Buffer：助沉剂/指示剂/Tris-HCl（pH=8，使DNA带负电）

染色：可用EB等

2、聚丙烯酰胺凝胶电泳（溴酚蓝跑到底）

制备：单体-丙烯酰胺，交联剂-Bis，催化剂-过硫酸铵Aps，加速剂-TEMED

混合：将上述试剂混合溶于Tris-HCl中（pH6.7-浓缩胶/pH8.9-分离胶）

缓冲液：Tris-Gly（pH=8.3）

Roding Buffer：在琼脂糖凝胶电泳Roding Buffer的基础上加入SDS、DTT、β-巯基乙醇

染色：DNA-银染/蛋白质-银染 或 考马斯亮蓝染（R250）

电荷效应、分子筛效应

PS：

1、6×Roding Buffer 意味着需要一份Roding Buffer /五份样品。

2、Roding Buffer：①助沉剂（蔗糖/甘油_{还有助于稳定PCR试剂}）②指示剂（溴酚蓝100~200bp；二甲苯氢2000bp，橙黄G-50bp）③缓冲

Ⅲ、PCR

1、体系：①模板：dsDNA/ssDNA，不用RNA（AMV或者MMLV）

②4种dNTP

③引物：注意设计原则**

④Taq酶和Pfu酶

⑤Buffer+镁离子

2、体系配置操作与注意事项：

①冰上操作

②不要少加、漏加（1μL注射时注意）

③顺序：水和Buffer（镁离子）——四种dNTP、模板、引物——Taq酶

④混匀：迷你离心机

举例：

2×PCR mix——25μL

上引——2μL

下引——2μL

模板——1μL

3dw——20μL

总的——50μL

3、反应条件

①94度——5min——变性

②94度——30s——变性

③55度——30s——退火（引物Tm-5，上下引物Tm相差不大）_{引物的Tm值近似计算：Tm=4（G+C）+2（A+T）}

④72度——t=s/v（稍长）——延伸

⑤72度——5min——终延伸

循环：②~⑤循环30~35次（RT-qPCR一般在40次以上）

PS：菌落PCR、等温环介导PCR

Ⅳ、玉米基因组DNA的提取以及后续

一些问题思考

1、提取实验步骤：

①取100mg玉米组织，加入1000μL预冷（液氮_{易脆/保护}）的细胞核裂解液，用研钵（细胞匀浆器剪切力太大）研磨充分，约30秒，取700μL进行实验

②置于65℃ 30min

③冷却后，加入1.8μL RNase溶液，颠倒10次混匀，37温度℃水浴15min

④加入200μL protein沉淀液，颠倒10次混匀，静置5min，12000转离心5min

⑤取上清，加入0.1倍体积的5mol/L NaCl，混匀后再加入等体积_（全部）的异丙醇，颠倒混匀，出现丝状物，12000转，离心5min

⑥去上清，用700μL 70%乙醇洗涤沉淀，12000转，离心1min

⑦去上清，用500μL 70%乙醇洗涤沉淀，12000转，离心1min

⑧去掉上清，风干，加入150μL DNA溶解液重溶DNA，65℃水浴20~30min，期间轻弹或涡旋混匀促进溶解。

2、PCR反应管的制备

去离子水	22.5μL
2×PCR mix	25μL（1×）
正义引物（F）	1.0μL （0.2μmol/L）
反义引物（R）	1.0μL （0.2μmol/L）
模板DNA	0.5μL （0.05μg）
总体积	50μL

3、核酸特征吸收波长在260nm，所以用来定量

以1mmol/L pH7.5 Tris为参照，取50μL，稀释12倍，测定260nm和280nm下的吸光度值

1cm光程，pH7.0，吸光值在0.1~1之间的线性关系大致如下

1 OD260相当于	dsDNA	50μg/ml
	ssDNA	37μg/ml
	RNA	40μg/ml
	寡核苷酸	33μg/ml

Ⅴ、RNA提取

1、实验步骤

①取100mg玉米组织，加入液氮充分研磨，加入1000μg Total RNA Extractor(Trizol)，再充分研磨

②液化后转移至1.5mL EP管中，室温放置5min

③加入0.2mL氯仿_{(四氯化碳)}，涡旋振荡15s，室温放置3min。12000转 4℃离心10min

④吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入等体积的异丙醇，混匀，室温放置20min(异空间之DNA的抽提)

⑤12000转 4℃离心10min，弃上清

⑥加入1mL 75%乙醇洗涤沉淀。12000转4℃离心3min，弃上清，室温干燥5~10min

⑦加入30μL RNase-free ddH₂O，充分溶解RNA。将得到的RNA溶液置于-70℃保存或用于后续实验。

PS：mRNA的逆转录

三、生化实验

_{分光光度计的原理与使用(三种调零方式：黑皿、挡板、中间卡槽)}

Ⅰ、还原糖的测定

DNS

滴定法：次甲基蓝、碘量法（主要用于Glc，因为氧化性弱无法氧化酮糖）/斐林试剂（所有还原糖）

比色法：蒽酮试剂、DNS试剂（所有还原糖）

滴定法更准确，但比色法*更便捷。（搞清各种方法的优劣）

1、DNS法

原理

实验过程：

①标准曲线的制作【平行实验（至少两套）***】：

1）取5支试管按下表配置不同浓度的葡萄糖标准溶液。（初液浓度1000μg/mL葡萄糖）

管号	1000μg/mL葡萄糖（mL）	水（mL）	葡萄糖终浓度（μg/mL）
1	1	9	100
2	2	8	200
3	3	7	300
4	4	6	400
5	5	5	500

2）另取6个试管按下表加入各种溶液

管号	水	100μg/mL	200μg/mL	300μg/mL	400μg/mL	500μg/mL	DNS
1	0.5mL						0.5mL
2		0.5mL					0.5mL
3			0.5mL				0.5mL
4				0.5mL			0.5mL
5					0.5mL		0.5mL
6						0.5mL	0.5mL

3）混匀后沸水浴加热5min，取出冷却，加入4mL水混匀，以1号管作为空白调零，测定其OD₅₄₀

4）以葡萄糖含量（μg）为横坐标，光密度值为纵坐标作标准曲线

②淀粉中还原糖的鉴定：

1）称取淀粉1克放入烧杯中，先用少量水调成糊状*（如果加大量很难搅匀）

2）再加50~60mL水摇匀，50度保温20min，使还原糖浸出，定容至100mL

3）过滤（一部分就好）

4）取滤液0.5mL测定还原糖，方法与标准曲线制作相同（空白不要忘了再做一次）

5）根据OD值在标准曲线上查出还原糖含量

③测总糖

将淀粉完全水解（酸/碱水解，沸水浴加热30m）

注意事项：

①平行实验（同时）

②用酒精浸泡比色皿让其保持无色，再用水冲洗（不挂水珠）

③用一个比色皿，减少系统误差

④一定从低浓度到高浓度（高浓度颜色深），做完低浓度的可以用高浓度溶液冲洗

Ⅱ、酶的测定

酶活测定方法：比色法（加或不加显色剂，POD是后者）、紫外法（还原型辅酶Ⅰ/Ⅱ在340nm处有吸收，黄素脱氢酶不行）、比浊法（溶菌酶，使得溶液逐渐变澄清）PS：比浊法用缓冲液和加底物不加酶的溶液进行调零。

1、唾液淀粉酶的活力测定以及Km的测定

原理：碘与淀粉作用呈蓝色，蓝色在600nm处为最大吸收值，颜色的深浅与淀粉浓度成正比。唾液淀粉酶可以将淀粉水解为不与碘呈色的寡糖。单位时间内此酶水解淀粉的量与酶的活性成正相关。

操作步骤：

①标准曲线的制作

管号	1	2	3	4	5	6	7
0.4g/100mL淀粉液μL	0	20	40	60	80	100	120
0.01M碘液mL	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1
水mL	2.9	2.88	2.86	2.84	2.82	2.80	2.78
50mM pH6.8 磷酸缓冲液mL	1	1	1	1	1	1	1

混合均匀后，以1号试管作对照测定600nm的吸收值，以淀粉的μg数为横坐标，以OD₆₀₀为纵坐标作图。

②酶促反应初速度范围（产物与时间成正比）的测定

管号	1	2	3	4	5	6	7	8
1g/100mL淀粉液μL	0	150	150	150	150	150	150	150
水mL	2.4	2.25	2.25	2.25	2.25	2.25	2.25	2.25
缓冲液mL	1	1	1	1	1	1	1	1
酶液mL	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
每支试管加酶混合均匀37度保温，2~8号试管保温时间分别为1~7分钟。 每支试管保温后取出，立即加碘液（钝化淀粉酶）。
碘液mL	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1

混合均匀后，以1号试管为对照测定600nm的吸收值。根据OD值在标准曲线上查出淀粉的量，由加入淀粉的总量减去查出淀粉的量即为水解的淀粉量，以反应时间为横坐标，以淀粉的水解量为纵坐标作图，找出初速度范围。

③酶的活力测定

管号	1	2	3	4
1g/100mL淀粉液μL	0	200	200	200
水mL	2.4	2.2	2.2	2.2
缓冲液mL	1	1	1	1
酶液mL	0.5	0.5	0.5	0.5
混合均匀后37度保温X分钟（根据初速度范围），取出，立即加碘液
碘液mL	0.1	0.1	0.1	0.1

混合均匀后，以1号试管为对照测定600nm的吸收值。根据OD值在标准曲线上查出淀粉的量，由加入淀粉的总量减去查出淀粉的量即为水解的淀粉量，求出酶的活力单位数（每分钟水解1μg所需要的酶量为一个活性单位）。

④Km的测定

管号	1	2	3	4	5	6	7
1g/100mL淀粉液μL	0	75	100	125	150	175	200
水mL	2.4	2.325	2.3	2.275	2.25	2.225	2.2
缓冲液mL	1	1	1	1	1	1	1
酶液mL	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
混合均匀后37度保温X分钟（根据初速度范围），取出，立即加碘液
碘液mL	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1	0.1

混合均匀后，以1号试管为对照测定600nm的吸收值。根据OD值在标准曲线上查出淀粉的量，由加入淀粉的总量减去查出淀粉的量即为水解的淀粉量，以1/[S]为横坐标，以1/[酶水解的淀粉量]为纵坐标作图，求出Km。

注意事项：

①配置酶液需要放在冰里

②先做不需要酶的实验，酶最好现配现用

③酶活性需要调节（1：XX）

③*一定要记得中止酶促反应

④*控制时间

2、最大吸收峰的测定（以防险恶的出题老师）

①取第一管和中间管（3、4、5）

②以第一管为对照测定在420~700nm（每次间隔20nm）的OD值

Ⅲ、蛋白质浓度测定

方法：双缩脲法、考马斯亮蓝法（μg级，非化学反应，稳定性较差，且受pH影响）、紫外法（最简单）、Lowry/福林酚法（μg级，最好）、凯氏定氮法（前四种要求无色溶液，但最后一种会受到其他含氮物质的干扰）

1、双缩脲法

原理：无需多言。紫红色络合物最大吸收峰在540nm，稳定性好，灵敏度差1~10mg。

步骤：

①标准曲线的制定

管号	1	2	3	4	5	6
标准蛋白质/mL	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
水/mL	1.0	0.8	0.6	0.4	0.2	0
双缩脲试剂/mL	4	4	4	4	4	4

充分摇匀后，恒温水浴25度（其实跟室温差不多，也不用水浴了）保温30min，以1号试管作对照调零测定其他试管540nm处的吸收值。取两组测定的平均值，以蛋白质含量作横坐标，吸收值作纵坐标绘制标准曲线。

②取两支试管各加入未知浓度蛋白液1mL，加入双缩脲试剂4mL 25度保温30min，测定540nm吸收值，通过此吸收值在标准曲线上查出样品中蛋白质的含量。

2、考马斯亮蓝法（G250-测蛋白质/R250-电泳染色）**

原理：考马斯亮蓝G250染料。在酸性溶液中与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基结合。考马斯亮蓝G250溶液颜色为棕黑色，λ_max=465nm，蛋白质-染料复合物为蓝色，λ_max=595nm.颜色深浅与蛋白质的量成正比，通过测定A₅₉₅吸光值可知与其结合的蛋白的量。

考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是一种微量方法。此法快速、灵敏、优点突出，因而得到广泛应用。考马斯亮蓝法是目前灵敏度最高的蛋白质定量方法之一。但稳定性较差。除了pH影响外，有一些物质干扰此法的测定，主要干扰物质有：去污剂、Triton X-100、SDS等。

步骤：

①蛋白质浓度标准曲线制作

管号	1	2	3	4	5	6	7
标准蛋白质/mL	0	0.02	0.04	0.06	0.08	0.10	0.12
0.9%NaCl/mL	1.00	0.98	0.96	0.94	0.92	0.90	0.88
考马斯亮蓝/mL	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
A595

混匀，室温静置3min，以第一管为空白，于波长595nm处比色，测定吸光值。以蛋白质浓度为横坐标，A₅₉₅吸收值为纵坐标作图。

PS：加入食盐的主要目的是为了提高染色效果和染色的稳定性。

②样品蛋白质浓度测定

取两支试管，分别加入蛋清稀释液1.0mL以及考马斯亮蓝染液4.0mL，混匀，室温静置3min。，于波长595处比色，读取吸光值。

Ⅳ、酵母糖酵解速率的测定

问题思考

通过丙酮酸的生成率可以测定单位质量的酵母酵解糖的速率。

原理：

酶促反应产生的丙酮酸可与2，4二硝基苯肼发生加成反应，生成丙酮酸-2，4二硝基苯腙，该产物在碱性环境中可转化为红棕色的苯腙硝醌化合物，其颜色的深浅与丙酮酸的生成量成正比，通过标准曲线可以查出丙酮酸的生成量。

实验步骤：

①标注曲线的制作

编号	0	1	2	3	4	5	6
蒸馏水/mL	0.5	0.48	0.45	0.4	0.3	0.2	0.1
EMP1/mL	0	0.02	0.05	0.1	0.2	0.3	0.4
EMP2/mL	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
室温放置/min	5
EMP3/mL	4	4	4	4	4	4	4
室温放置/min	10
OD520nm

EMP1：丙酮酸标准品（1μmol/mL）

②酵母糖酵解速率的测定

1）按照下表

	7	8	9	10	11	12
EMP4/mL	1	1	1	1	1	1
EMP5/mL	1	1	1	1	1	1
EMP6/mL	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
37℃/min	3
酵母/mL	/	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
37℃/min	0	3	4	5	6	7
EMP7/mL	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
酵母/mL	0.5	/	/	/	/	/

酵母：0.05克/mL

_{EMP6（硫酸肼）的作用，稳定丙酮酸，不让其进入后续反应}

2）从7~12号管中分别取2mL液体，12000rpm离心3min

3）每管加入0.5mL EMP2，混合均匀后室温放置5min

4）每管加入4mL EMP3，混匀后室温放置15min，测OD值

Ⅴ、荔枝中游离氨基酸的层析分离_{——薄层层析}

原理：

薄层层析法利用不同物质的分配系数，使混合物随流动相移动而分离的方法。

硅胶对极性氨基酸的吸附能力强。

Rf=原点到层析点中央的距离/原点到溶剂前沿距离。（一定条件下，相同物质的Rf一定）

步骤：

看看我的

1、 取薄层层析板板，在一端距边缘1.5cm处用铅笔轻画一条直线，在直线上每隔1cm做一次标记，共记四次

2、称量2g荔枝果肉，置于研钵中，加入0.5mL 10%TCA_{（变性蛋白质）}和少量石英砂，研磨成匀浆

3、将所有匀浆液倒入2mL离心管，12000rpm离心5min

4、吸取2 μL S、E、F和样品上清标准品依次点在3个记号点上，风干，并在各点表上样品名

5、将层析板置于层析缸中，约40min后取出

6、烘干10min。

7、计算Rf

Ⅵ、蔗糖酶的纯化和比活力测定

一、背景

二、分离纯化

三、蔗糖酶纯化前后活力测定

第二模块

一、植物学实验

Ⅰ、实验基本操作

一、显微镜的使用

无他，记一下科勒照明。

二、制片技术

切片（洋葱鳞片叶）、涂片（番茄果肉）、刮片（辣椒表皮，观察初生纹孔场）

（PS：洋葱外表皮有紫色液泡，内表皮液泡无色；若要观察胞间连丝，可使用柿胚乳）

三、徒手切片

注意事项：①横切时记得使用双面刀片，单面刀片太厚了。②多切一些，以量取胜。③无他，唯手熟尔。

四、植物组织观察

1、保护组织

2、同化组织

黑藻（ps：黑藻是单子叶植物，水鳖科），还可以观察到胞质环流

3、疏导组织

黄豆芽（纵切），不用绿豆芽（输导组织不发达），番红染色（间苯三酚染木质素特异性更强，但需要高H⁺浓度）

4、机械组织

厚角组织（**芹菜的茎，徒手切片，位于维管束外侧，中间隔了一些薄壁组织），石细胞（梨的果实，涂片，番红染色）

5、分泌组织

分泌道、分泌腔【裂生型、溶生型、裂溶生型（**柑橘皮徒手切片）】（PS：裂生型周围细胞完整，溶生型不完整）

五、植物内含物观察（染料）

1、淀粉

玉米胚乳（碘液，淀粉粒被染为黑蓝色）

2、蛋白质

**小麦糊粉层（碘液，糊粉粒被染为黄色）

3、油类

花生（苏丹系列染料，油滴特异性染为橘红色）

4、结晶

某生竞生的手绘图

菠萝细胞液（无需细胞结构/无需染色，直接可以观察到草酸钙针状结晶）

六、绘图

原则：①越简洁、清楚，越好_{（打点、斜线能省就省）}；②图注在一侧；③将能显示特点的结构标注_{（像什么薄壁组织就算了）}；④标题在下侧

Ⅱ、植物营养器官切片”鉴赏“

[1]切片

2、南瓜的茎，注意厚角组织、双韧维管束、叶迹维管束

3、（苋科）空心莲子草的茎，注意特别的次生生长

4、（三白草科）鱼腥草的根状茎，注意凯氏点

5、（锦葵科）木槿的茎，注意“漏斗状”结构

6、（天南星科）绿萝的茎，示攀缘植物的茎（就是没啥特别的）

7、（禾本科）白茅的茎，注意叶迹维管束、内皮层、薄壁组织次生化

8、（鸢尾科）小蝴蝶花的根，注意双层马蹄形加厚、周木维管束

9、（百合科）麦冬的根，注意内皮层与髓鞘的变化

10、绿萝根，示单子叶植物的根

11、竹柏/红豆杉，示裸子植物的次生生长

12、某种植物的根（同学说是何首乌），示双子叶根的三生生长

13、叶

• 旱生植物的叶，注意皮层、气孔分布、气孔下陷/气孔窝、叶肉的分化、角质层（共性）、后含物（_{钟乳体-有柄、碳酸钙；簇晶-无柄、草酸钙）（原谅我把手切伤了实在切不出叶的切片<——菜的借口）}
  • （大戟科）印度橡胶
  • （天门冬科）凤尾丝兰
  • （老朋友）夹竹桃
• C3与C4的叶，最好是看叶肉/叶绿体的分布
  • 竹子C3
  • 狗尾巴草C4

14、某种葫芦科的茎的纵切观察，注意各种横切面上的结构在纵切上的样式（各种导管、筛管、筛胞、纤维、厚角组织等）

15、离析材料的观察（简称抽卡式观察_{爆率低/没保底}）

16、绿萝的气孔，示单子叶植物的一种气孔

17、瓜蒌的气孔，示无规则型气孔

18、白菜的气孔，示平列型气孔

19、（豆科）葛藤的气孔，示不等型气孔

20、榕树的根，注意多原型木质部嵴、次生生长

21、小二仙草的茎？，注意气腔、晶体、维管组织

22、石松的茎，示编织中柱

23、某旋花科，示双韧维管束

24、（伞形科）香菜/芫荽根，示双子叶植物根的次生生长

25、（阿福花科）芦荟的茎，示单子叶植物的次生加厚

26、某种蕨类_{（貌似是水龙骨）}的茎，示星状中柱

27、（真蕨）鳞毛蕨的茎，示网状中柱

28、鳞毛蕨的孢子，注意孢子囊群、孢子囊、孢子囊柄、孢子、环带等

29、松针

• 黑松的松针，示两针一束

• 华山松的松针，示五针一束
• 雪松的松针

30、莲的根状茎-藕，示水生植物_{（原睡莲目）}的茎

31、*****木贼的茎，不示，死记

32、雪松的茎

33、（五加科）人参的根

34、牛膝根

35、***（卷柏科）翠云草

36、鸭跖草科

Ⅲ、植物检索表的使用与制作

Ⅳ、植物繁殖器官解剖

一、花图式

*花被卷叠式的判断需要使用花蕾。

二、花程式

三、各种代表性植物花的解剖

木兰科-含笑属-白兰

六出花科-六出花

兰科-石斛

禾本科-小麦/小盼草

葡萄科-乌蔹梅

十字花科-豆瓣菜

无患子科-七叶树

蔷薇科-粉花绣线菊/珍珠梅

卫矛科-卫矛

豆科-合欢

石竹，示特立中央胎座

绣球科-长江溲疏

杜鹃花科某植物

唇形科-鼠尾草

木樨科-女贞

紫葳科-蓝花楹

旋花科-菟丝子

菊科-向日葵/黄鹌菜（舌状花亚科）/某管状花亚科

伞形科-香菜

忍冬科-白花败酱

柏科（小孢子'花'也是花）

规律：①只要花瓣合生，雄蕊多半冠生，萼片多半合生。

第三模块

一、动物学实验

0、总论

一、分类检索

二、无脊椎动物解剖

1、草履虫

2、海绵→线形动物（轮虫）_{（观察永久切片）}

3、蚯蚓、蚂蝗

4、虾（=螃蟹）

5、蜘蛛

6、马陆/蜈蚣（只有一条马氏管）

7、蝗虫_{（东亚飞蝗）}、蟑螂、蜜蜂、蝴蝶、金龟子、家蚕、面包虫（黄粉虫幼虫）、蟋蟀（输卵管很长）

8、田螺、河蚌、扇贝、文蛤、蛏、鲍、牡蛎、贻贝、乌贼、章鱼

9、海星、海胆

三、脊椎动物解剖

1、骨骼：脊椎骨、头骨、鱼鳍、股骨？

2、肌肉（鸡腿：栖肌、贯趾屈肌）

Ⅰ、河蚌解剖

一、分类，检索，种

注意平时常见的解剖对象大概率是皱纹冠蚌而非无齿蚌（本人经验）

二、外形结构

1、贝壳位置区分（前后、背腹、左右）

2、测量（清华年喜欢考测量）：壳长、壳宽（壳高）、壳厚

3、贝壳外部形态（注意看要求去的是哪个壳）

①壳顶②韧带（有内外之分，扇贝是内韧带，河蚌和文蛤是外韧带）③生长线（不完全可以显示年龄）

4、贝壳内部形态

①壳顶②韧带③铰合部（无齿蚌无前/后侧齿，冠蚌有；无中央齿，文蛤有）

5、肌肉痕迹：前后闭壳肌、前后缩足肌、前伸足肌、外套膜原肌（外套线）、水管肌（外套窦）

PS：绘制左壳时一定要北部朝上（前部在右）

三、内部解剖结构（体分部：头部_{（不明显）}、足部、内脏团、外套膜、外套腔）建议解剖时按一下顺序观察

1、外套膜（出入水管/孔，出背入腹），外套膜与内脏团/两个外套膜之间的空隙形成外套腔。

2、肌肉系统（见上）

3、呼吸系统（两对瓣鳃_{其中外瓣鳃在雌性中变为育儿囊}，鳃小体、鳃丝、鳃小腔）PS：牡蛎和扇贝仅一对瓣鳃

4、循环系统

围心腔膜、围心腔、心脏（一心室两心耳）

动脉管：前/后大动脉（后大动脉向下走）

补充：心跳实验——加兴奋剂（升温）/抑制剂（降温/酒精），观察河蚌心跳变化

5、排泄系统

围心腔腺（即凯伯尔氏器，两个，咖啡色，在心脏前）肾脏（即鲍牙氏器，肾口_{从围心腔腺通到肾小体}、肾小体、膀胱_返回、肾孔→外套腔）

PS：肾孔紧靠生殖孔，大而光滑的是肾孔

6、神经系统

脑神经节（两个，位于三肌之间）脏神经节（位于后闭壳肌肌肉柱上）足神经节（两个或愈合为一个，位于足与内脏团相接处）

PS：建议先看口、咽、食胃，再看足神经节。

7、消化系统

（两对）唇瓣（切忌不要弄掉了）、口、咽、食道、胃（从此开始都是单层细胞）_{晶杆（搅拌、分泌消化物质、有或无）}、胰脏、肝脏（中肠突出形成，中肠腺）、肠（盘曲于足内）、直肠（穿过心室）、肛门（后闭壳肌顶）

8、生殖系统：生殖腺，雄白雌黄，内脏团内除消化系统外大部分

四、问题扩展

请以现有条件设计实验证明河蚌的摄食方法和食性以及在生产上的影响。（提示：可以利用食物残渣）

补充

标注结构时，可用一张三角形小纸片写上数字，插入相关结构，再在纸上标注。

Ⅱ、文蛤解剖（主要是记住与河蚌的不同点）

1、文蛤的壳顶前为小月面，后为盾面。

2、有中央齿，三枚；左壳前侧齿一枚，右壳两枚。

3、肌肉痕迹中，前缩足肌在前闭壳肌上方。

4、50度温水可以使文蛤开壳。

5、其后端愈合为出入水管。

6、围心腔腺在心耳上。

7、肾脏在围心腔外。（河蚌在内）

8、神经节红色容易观察。（脑神经节移至前闭壳肌背上方）

9、晶杆更容易被观察到。

10、文蛤穴居。

Ⅲ、克氏原鳌虾解剖

一、分类、检索、种

二、外形结构

1、分部：头（6）胸（8）部、腹（7）部（因为头部第一体节和腹部最后一·体节无附肢，故附肢数只有19）

2、各部分附属物（不包括附肢）

①头胸部：头胸甲：额剑（鳌虾上下扁平/对虾则左右扁平），有齿，可作为分类标准；鳃盖（有刺，胃刺、肝刺）；颈沟

柄眼：复眼（切片观察形状），测量——小眼（方形）/复眼的面积、小眼的数目

②腹部：外骨骼：背板/侧板_{（肋片、排骨）}/腹板

注意雌雄的区别

③体表开孔：雌雄均有：绿腺孔（大触角基部），肛门，口

雌性特有：雌孔（第三步足基部一对），纳精囊孔（第四、五对步足之间）

雄性特有：雄孔（第五步足基部一对）

3、（建议从后往前解剖）

附肢（头5胸8腹6）

名称	类型	原肢节数	功能
小触角	单（只有内肢）	3	感觉、平衡（有平衡囊）、触觉
大触角	双	2	感觉、触觉
大颚	单（内肢形成大颚须）	/	嚼食
第一小颚	单	2	摄食、感觉
第二小颚（颚舟片）	双，自此往下均为双肢型	2	摄食、辅助呼吸
第一颚足		1	摄食、感觉、呼吸
第二颚足		2	摄食、感觉
第三颚足		2	摄食、感觉
第一步足	（前三对步足成鳌状）	2，自此往下均为2	取食
二			取食、攻击
三、四、五			步行
第一腹足（雌性退化，只剩一肢）			游泳，辅助生殖
二~五			游泳，辅助生殖
六（尾肢）			与尾节结合组成尾扇
雄性第一、二对腹足			交接肢，辅助输精

ps：步足分为底节、基节、座节、长节、腕节、掌节、指节

三、内部结构

1、原始种类胸部8个体节各四对鳃（一对足鳃、两对关节鳃、一对侧鳃）

呼吸系统（鳃连于附肢）

鳃的类型	鳌虾	对虾、基围虾	沼虾
侧鳃	0	6	6
足鳃	6（第二颚足到第四步足）	6	1
关节鳃	11（第二颚足一对，第三颚足到第四步足两对）	12	1
肢鳃（驱动水流）	1（第一颚足基部）	2（第一、二颚足基部）	3

2、循环系统

组成：心脏（无心耳，马鞍形_{对虾等为三角形}）-心孔三对-动脉管7条（咽动脉1/触角动脉2/肝动脉2/腹上动脉1/胸直动脉1）

3、生殖系统

呈现H型，颜色越深，发育越成熟

4、消化系统

口、咽、食道、胃、中肠（肝，黄色）、后肠、肛门

胃磨（三个硬质突起，属于贲门胃）与过滤器（隔板和刚毛，属于幽门胃）

胼胝体（研磨食物？？）事实上是促进胃磨活动or储存钙供蜕皮后恢复

5、排泄系统（绿腺）

腺体部上有凸起（端囊），下以排泄管（白色海绵体）连接膀胱，膀胱有排泄孔。

6、神经系统

脑神经（三对：视神经、围食道神经、上唇神经）

围咽神经环

咽下神经（头部后三对神经节_（口器）和胸部前三对神经节_（足）愈合形成）

腹神经（胸5腹6）

7、肌肉系统

制片（成束横纹肌）

四、问题扩展

1、以现有条件设计实验证明克氏原鳌虾的食性。

2、虾和蝗虫在生活史上最大的区分。（虾成体仍然蜕皮）

3、虾和蝗虫中枢神经系统的区别。（虾两个神经节之间的神经索愈合）

Ⅲ、蝗虫解剖

一、分类、检索、种（棉蝗/大青蝗）

二、外形结构

体分部

头：外骨骼（额、颊、头顶、后头），触角（分三节，柄梗鞭，鞭节分亚节，丝状触角），单眼（3，倒品型），复眼（肾形，小眼则成六边形），*口器（上唇_{防止食物外溢、夹持食物}、上颚、下颚、下唇_{下唇须有味觉功能}、舌）

胸：翅（革质+膜质，覆翅，翅脉/脉向），三对足（前跗：中垫+爪；跗节分为真（3）假节，跗节式：3/3/3）两对气门，外骨骼（背/腹/侧板，前胸背板大、侧板小）

腹：分节【背板（雌雄：1~8正常，9+10愈合，11-肛上板），侧板（11-肛侧板），腹板（雌性：1~7正常，8以后愈合，并形成导卵器；雄性：1~8正常，9以后愈合，并形成生殖下板），附肢（尾须/肛须，由10或11体节的附肢变来；8、9附肢，产卵瓣），听器，八对气门，外生殖器

三、内部结构

1、呼吸系统

气门，气囊（气门气囊，仅储藏；内脏气囊_白色，还可交换），气管（支气管制片_{可从马氏管中找到}）

2、循环系统

心脏（八个心室，每个心室旁连有翼状肌_{属于循环系统}，八对心孔，后端封闭，血液从心孔入，从前部的背大动脉流出）

3、生殖系统

悬系带_{（悬挂于第一腹节背面）}——两侧附性腺——卵巢——两侧输卵管——在第七节愈合为总输卵管——通到第八节（此处还连有纳精囊，仅一个）

悬系带——精巢——输精管——射精管—_{连有附性腺}—阴茎（还连有贮精囊_管状）

4、消化系统

口、咽、食道、嗉囊、砂囊（被从后发出的6个胃盲囊_{向后还发出6个}遮盖）、中肠（胃）、回肠、结肠、直肠

消化腺：胃盲囊，唾液腺（腺体+唾液管，在胸部，小心不要搞烂）

5、排泄系统

马氏管（单细胞围成，黄色，250余条，制片），脂肪体（尿酸）

6、神经系统

脑：围咽神经、单眼神经（3）、复眼神经（2）、围食道神经（2）、上唇神经（2）、触角神经（2）

围咽神经环

咽下神经（头后3，胸前3）

腹神经：胸3腹5（不包括咽下神经）

7、肌肉系统

胸部肌肉制片

四、问题扩展

1、请从遗传学角度分析蝗虫为什么有群居相和散居相？

Ⅴ、家蚕解剖

一、分类、检索、科

二、外形结构

体分部

头：触角一对（短小，分三节，丝/刚毛状），口器（咀嚼式，下唇有吐丝孔），外骨骼（头部有Y形蜕裂缝），单眼（6对，侧单眼_{昆虫幼虫一侧凡多于一个就叫侧单眼}）

胸：气门一对，胸足三对（分节，具爪）

腹：气门八对，腹足五对（最后一对称为臀足，不分节，具钩列，被称为伪足），雌性臀足前有四孔，雄性仅两孔（赫氏孔），尾突（蚕蛾科的特征）

三、内部结构

1、循环系统

心脏：直管状（背/肠壁上，通过从侧部解剖可以观察到）

2、呼吸系统

气门、支气管（制片）呈现辐射状

3、消化系统（背部解剖时小心）

口、咽、食道、肠（中肠+回/结/直肠）

无消化腺，唾液腺特化为丝腺

4、丝腺系统

（从前往后）口器——射丝部（菲利普氏器？）—_{两侧输丝部在咽下合并}—输丝部——贮液部——泌丝部

5、排泄系统

马氏管（在回肠前，两个各分三支），脂肪体（白色圆球状，不是蝗虫的黄色，储存尿酸）

6、生殖系统

生殖芽球

7、神经系统

_{神经节为玫瑰红色的点}

_{最后两个神经节紧靠在一起明显，可以先找}

口球神经（很小）——一对脑神经节——围咽神经环——咽下神经节_（绿色）——围食道神经——腹神经（胸5腹6）

包括脑神经节、咽下神经节、腹神经在内，一共13对神经节

Ⅵ、扇贝解剖

一、分类、检索、种

二、外形结构

1、贝壳外观

位置区分（前后_{前后壳顶突起，前耳长/后耳短}、背腹、左右）

壳顶、生长线（海产、区分度不大）

2、贝壳内面（去左壳）

铰合线

三、内部结构

1、外套膜/腔

膜：外层，背贴壳；中层：触手、外套膜眼、纤毛；内层：触手（短）

无出入水管（触手控制）

2、肌肉系统

足肌、外套膜原肌、闭壳肌（只有后，绝大部分是横纹肌，右上少部分为平滑肌）、缩足肌（后）

足丝（非肌肉，附着）

3、呼吸系统

鳃：假瓣鳃，无育儿囊（无钩介幼虫）

4、生殖系统

雌：黄/红，月牙形，有肠穿过

雄：白，月牙形，有肠穿过

有雌雄同体

5、排泄系统

肾脏：月牙形（位于生殖腺与闭壳肌之间）

围心腔腺

6、神经系统

脑神经节与足神经节（各两个），位于足与口唇之间

脏神经节（一个），四方形，位于后部生殖腺下方

PS：若生殖腺发达，脑神经节被挤入肝脏

7、消化系统

口唇、口、咽、食道、胃/肝脏、肠、直肠（穿过心室）、肛门

肠穿过生殖腺，分为下行肠和上行肠

消化腺：肝脏、晶杆

8、循环系统

心脏（一心室、两心耳），心耳上的颗粒为围心腔腺。

Ⅶ、蚂蝗解剖

一、形态结构

1、体分部：分为头部、中央部/躯干部、后部

2、外部结构：

①叶片状，背面隆起，腹面平，前窄后宽

②附属结构

头部（六个体节）：前吸盘（前有突起-口前叶）、眼点（10）、口躯干部：生殖环带（生殖季节出现）_{环带前部3个体节、环带部4个体节、环带后部11个体节（可见肾孔）}、雄孔雌孔（位于环带部，各一个，前雄后雌）、

后部：后吸盘（七个体节）、肛门（肛节）

3、体环：一般来说，三个体环为一个体节_{（看起来只有27个体节）}

二、内部结构

1、解剖方法

2、循环系统：开管，血窦（4个）

3、消化系统：口、咽、嗉囊、嗉囊盲囊*（储存，延伸形成侧盲囊）、肠、肠盲囊，蛭素

4、排泄系统：肾管（17对）

5、生殖系统：精巢（11对）、_（向前）输精管、储精囊、射精管、前列腺（腔）、阴茎

（在雄性生殖系统后方）卵巢、输卵管、总输卵管、蛋白腺、阴道（很硬）、雌孔

6、神经系统：_{去掉消化系统后，先找咽下神经，再找脑}

脑（咽背面）、围咽神经、咽下神经、腹神经链

三、问题拓展

1、蚂蝗吸血为什么血液储存于其体内大半年而不变质？（1、体内没有蛋白质水解酶_{消化由细菌完成}；2、蛭素；3、共生菌）

2、设计实验证明蚂蝗是怎样感知人和动物而去吸血的。

Ⅷ、蝴蝶（菜粉蝶）

前言、翅脉（纵横条纹，主要由气管组成_{纵脉支撑、横脉加固}）

1、类型

①纵脉：从基部到边缘

②横脉：纵纹之间的

③凸凹脉：褶皱凸（+）褶皱凹（-）

④副脉-纵脉的再分支

闰脉-相邻的两纵脉之间交插

系脉-两条或以上脉分段相连形成的一条脉

2、脉序/脉相（翅脉的分布形式）

①（假想的）的原始脉序：七纵六横

3、翅脉的变化

①增多：副脉（直翅目、ji翅目、白蚁）与闰脉的增多（蜉蝣目、蜻蜓目、直翅目）

②减少：合并或消失

翅脉

4、翅丝：翅脉把翅面分成小丝

开丝

闭丝

5、翅的分区：三缘三区三角三褶

一、分类-科

二、外形结构

1、体分部：

①头部：复眼一对，单眼无，触角一对（球杆状），口器（虹吸式：上唇不发达；上颚退化；下颚外叶伸长，两侧合并形成食管，下颚须退化；下唇退化，下唇须发达_味觉，且有不同形状；舌在下颚外叶中，不可见）

②胸部：足（前足的基节长，中后足的短而壮；跗节5-5-5），翅（膜质、粉末状鳞片（取R区观察）_形状各异；翅脉_{（检索表）}接近原始脉相，中脉基部消失，形成中室）

③腹部：雌性可见7个体节（8节及以后延长成为产卵须）；雄性可见8个体节（9、10节形成外生殖器）

三、内部结构

生殖系统

1、解剖方法

2、循环系统：心脏（直管状）

3、呼吸系统：气门十对（取支气管观察）

4、生殖系统（结构总体类似于蝗虫）

传精囊（腺）、交配囊、储胶囊、胶腺

5、消化系统

嗉囊突出于消化道

消化腺：无胃盲囊，有胸唾液腺

6、排泄系统：马氏管（每侧三条，同幼虫）

7、神经系统

脑

围咽神经环

咽下神经

腹神经链（胸3腹5）

8、肌肉系统：取胸部肌肉制片

Ⅸ、田螺

一、形态结构

1、田螺的贝壳

结构名称和位置：壳顶、螺层（体螺层）、缝合线、生长线、螺旋沟、脐、左旋/右旋（淡水生多右旋）、壳口、厣（足腺分泌形成，也有生长线）

测量：壳高、壳宽、壳口高_{（前沟基部到后沟）}、壳口宽_{（外唇到内唇）}、壳厚（单层）

2、去壳（包起来打碎）

3、体分部

头部：外套膜（边缘增厚形成领）、出水管/出水管、开孔（子宫开孔_雌孔、肛门、排泄孔）、呼吸器官（鳃，丝状栉鳃）

足部

内脏团

二、内部结构

1、呼吸系统：出入水管、鳃、外套膜

2、头：吻、口、触手_触角（一对。右触手长为雄性交接器）、眼点（触手基部，一对_陆生两对）

3、排泄系统

肾脏（三角形，淡绿色，一个）、排泄管（黄色）、排泄孔（肛门内方）

4、循环系统

围心腔膜、心室1（硬）心耳1（软）

5、生殖系统

雌性：输卵管、子宫、雌孔（出水管内方）

雄性：精巢、输精管（长）、前列腺、射精管（右触角）

6、消化系统

吻、口（齿舌_{中央齿、侧齿、缘齿}，齿式：2 1 1 1 2）、咽、食道、胃（螺旋部背方）、肝脏、肠、直肠（子宫下方、排泄管上方_{不穿过心室}）、肝门

（把吻剪开可以看到葡萄状）唾液腺（无消化酶）

7、神经系统

（唾液腺下方、消化道上方）脑（一对，中间相连）、_{（脑下方）}足神经节

二、生态行为学实验

0、总论（必备知识）

1、动植物种类的辨识

2、实验设计（标题、假设、仪器设备和材料、实验步骤与方法、预期结果_{模糊数据、}结论）

3、取样方法及确定样方

种群、群落：物种-面积曲线法

4、统计学知识

t检验、卡方检验、方差分析、多重比较、秩和检验、回归分析

5、区分N与n

Ⅹ、蜜蜂

*1、翅脉

*2、足（携粉足）

3、解剖方法(大头针插在大颚上)

4、内部结构

心室5~6个

*消化道_{三个胃-蜜胃（嗉囊）-前胃（砂囊）-胃}

*消化腺（胸唾液腺、头唾液腺_{脑神经节背方}、颚唾液腺，直肠腺_{（防止粪便发酵）}，胃盲囊无）

*神经系统（胸神经节2、腹神经节5）

生殖系统别找（解剖的一定是工蜂，而其生殖系统退化）

马氏管80~100条（蟑螂100~120条）

Ⅰ、生态学基本内容

1、动植物的分类及其生态环境分析

_{PS：滨螺-岩石滩、扇贝-泥滩、文蛤-沙滩}

2、动物对温度适宜的选择（耐热性测定）

3、变温动物和植物的有效积温

4、种群的密度测定

①去除取样法

②单标单捕法

③多标多捕法

5、种群的空间分布测定

①聚集强度分析：I指数法

②泊松分布*

③正二项分布

④负二项分布*

⑤莱曼分布

6、种群增长

①种群的逻辑斯蒂增长*

②种群的时滞增长

7、种间竞争

8、种群扩散

9、种群的遗传与进化

10、种间关联*

11、群落相似性测定*

12、群落聚合分类

13、物种多样性测定*

实验三、变温动物和植物的有效积温测定

一、公式

1、K=N×（T-C）

2、C的计算

①两种实验温度，C=（N₂T₂-N₁T₁）/（N₂-N₁）

②三种以上，C=[∑v²×∑T-∑v×∑(T×v)]/[n×∑v²-(∑v)²](v是发育速度,n是v的倒数)

③K的测定

④N的测定

二、数据(三化螟)

组号	温度累积(日度)	天数(d)
1	288	13
2	241	10

三、任务

1、计算每组的T

2、计算C

3、计算K

四、问题扩展

1、写出三化螟的分类地位_(螟蛾科)

2、为什么两批卵发育的历期不同_{(日均温度不同)}

五、总结

①有效积温法则的用处_{(预测害虫发生的代数/预测动物分布的边界/控制发育时间/合理制定农业区划)}

②有效积温法则的缺陷_{(认为低温毫无作用(滞育生物必须低温)/数据来自实验室/低温有时有好处,能够加速某些发育/不一定呈现线性关系(温区范围))}

实验四、种群数量调查(单标单捕法,林可-彼得孙法)

一、公式

1、N=(M×n)/m

2、置信区间(95%) N±2×SE

3、标准误SE=N×[(N-M)×(N-n)/M×n×(N-1)]^0.5

df=n

二、数据

第一次捕捉80只,全标放回

第二次捕捉60只,有标记的的是20只

三、任务

1、计算N

2、计算SE

3、计算N±2×SE

四、问题扩展

1、该方法的原理是什么?_{(标记动物在第二次取样中所占比例与所有标记动物在整个种群中的比例相同)}

2、该方法做了哪些假设?_{(标记物不能影响动物活动/标记物不能脱落/标记物不能太醒目/封闭种群,个体数目不变/假设种群大多数个体随机分布,标记个体分布均匀/重捕概率相同)}

3、该方法调查种群数量允许多大的样方?(标记不少于10%)

4、标记重捕的缺点(假设的漏洞)

_{PS:第二次重捕数不应超过第一次重捕数}

五、模拟实验

烧杯1个,白色圆球1包,紫色圆球1包

1、请以此为材料,写出对某动物种群数量调查作一实验设计(假设即原理)

2、计算出实验设计结果

实验五、生命表

零、前言（类型）

1、静态生命表（特定时间生命表）_{世代重叠，起始为1}

2、动态生命表（特定年龄生命表/同生群生命表）_{世代不重叠，起始为0}

3、图检生命表

4、综合生命表（包含出生率）

一、生命表

1、x、n_{x（动态）}、l_x(静态)、d_x、q_{x（1000×）}、L_x、T_x、e_x

2、计算公式：L_x（x→x+1的平均存活数）=（l_x+l_x+1）/2

T_x（x期后平均存活数的累计数）=∑l_x（从x期往后）

e_x（期望寿命）=T_x/l_x

3、调查数据:n_x（l_x）、d_x

二、数据(连续式)

x	lx	dx	1000qx（保留一位）	Lx（保留一位）	Tx（保留一位）	ex（保留两位）
1	1000
2	863
3	778
4	694
5	610
6	526
7	442
8	357
9	181
10	59
11	51
12	42
13	34
14	25
15	17
16	9

任务：

1、用熟悉公式计算表中空白栏

2、绘该动物存活率曲线图，写出曲线类型（A/Ⅰ）

3、假如x为年，请写出动物的可能名称（哺乳动物）

4、特定时间生命表的生物应该有哪些特征（世代重叠、种群大小稳定、年龄结构稳定、相等的时间间距）

5、特定时间生命表反映了种群哪些规律

生命表绘制步骤

三、模拟实验

1、假定你有500粒黄豆，1张18K坐标纸，请以此为材料，设计一动物生命表数据实验

2、你有骰子30粒，请以此为材料，设计一动物生命表数据编制

实验六、种群空间分布型测定一

零、前言

分布型：

分布概率：正二项分布、泊松分布、负二项分布、莱曼分布

图：均匀_（正）、随机_（泊）、集群_{（负、莱）}

聚类强度分型：I=v/m

分布：

• 尺度
  • 大-斑点
  • 小-才分为三类

一、公式

1、m=∑f·x

2、v或s²

v=[∑f·x²-(∑f·x)²/n]/(n-1)

3、I=v/m（个人习惯不减1）

I=1,随机

I<1,均匀

I>1,集群

二、数据（桃、蚜虫）

x	f	f·x	f·x2
0	102
1	29
2	16
3	4
4	1
5	2
6	2
求和	156	99	267

任务：1、完成表中空白栏计算

2、计算m（0.6364）

3、计算v（1.3176）

4、判断：①计算I（2.0756）②判断（集群）

三、模拟实验

你有芝麻200粒左右，坐标纸一张，请以此为材料设计一动物分布型的调查、计算、判断

四、问题扩展

1、写出桃树的分类地位_{（蔷薇科桃树）}

2、桃胶是什么_{（桃树的分泌物）}

3、I指数为什么1/0之分_（减1）

4、蚜虫的生活史_{（卵-若虫-成虫）}

5、蚜虫的成/若虫是同一分布型吗？_{（若虫-集群；无翅蚜-集群、孤雌生殖；有翅蚜-随机）}

实验七、种群的空间分布型测定二——泊松分布（随机）

频次法

一、公式

r=x

概率公式Pr=（m^r/r！）×e^-m

样本N：N·Pr（f'r）=N·e^-m·（m^r/r！）算0

计算递推公式：N·Pr=（m/r）·N_P（r-1）

理论频次f'r小于5，合并：N·Pr=N-∑N·Pr（之前的）

（原则：理论频次f'r小于5就合并：①最后数小于5不与前一位合并；②不是最后一位小于5，将后面均合并；③如果合并后是最后一位仍小于5，不再合并；④如果要合并，要改变df的计算方式）

二、判断标准

1、df=n-2（n是实验组数）

2、判断：p小于0.05

三、数据

x	f	f·x	f·x2
0	225
1	130
2	40
3	10
4	3
∑

任务：1、计算表中空白栏

2、计算平均值m（保留四位）

3、计算e^-m

4、计算v（保留四位）

5、依泊松公式，N_P0~N_Pr(一位)

6、将计算结果入泊松表并计算卡方（3位）

x	f	f'	x2
0	225	220	0.114
∑	408	407.8	2.756

7、确定df_(n-2=3)，查卡方表（0.05）_（7.815），确定是否为泊松分布_（Σx2_{<7.815，符合泊松分布）}

四、问题

1、泊松分布与随机分布一样吗_{（不一样，一个是概率，一个是图）}

2、从表中数据分析，为什么小于5要合并_{（数据越小，卡方值越大）}

3、蝗虫成/若虫均是同一分布型吗_{（成虫有随机和集群）}

4、蝗虫的其他方面_（解剖）

五、模拟实验

现有坐标纸一张，铅笔一只，请以此为材料设计某生物的空间分布型测定及计算

实验八、种群空间分布型测定三——负二项分布（嵌纹分布）

一、公式

1、概率Pr=[（K+r-1）！/r！·（K-1）！]·q^-K-r

2、理论计算N·Pr=N·[（K+r-1）！/r！（K-1）！]q^-K-r·Pr

N·P0=N·q^-K

3、递推N·Pr=（K+r-1）/r×R×N·P（r-1）

4、小于5合并

5、参数计算：q=1+P，P=v/m-1，R=P/r，K=m/P

6、确定

①计算df：df=n-3

②确定，同泊松分布

二、数据

m=0.6346，v=1.3172，N=156

任务：

①计算参数P、K、q、R

②计算NP0~NPr（保留四位）

③将上述NPr列表

			卡方
	102	101.
	29	31.
	16	12.
	4	5.9
	5	5.122
∑	156	156（因为经历了合并，所以肯定一样）	1.4658

④确定df，查卡方表

三、问题

1、频次法的优缺点有哪些

四、模拟实验

实验九、种群增长（种群在有限环境中的逻辑斯蒂增长/增长率随N变化的连续增长）

一、公式

参数计算：

Ⅰ、K：①目测法②平均法③三点法（三个点在不同时期/若没有绘图，则按照等时间间距取三个点）

Ⅱ、a与t：a-rt=ln[（K-N）/N）]，a—种群的起始数/r—种群的瞬时增长率

方法：作图/方程组

二、数据

d	观察个体数N	（K-N）/N（3位）	ln[（K-N）/N]（3位）	拟合值(1位)
1	9.6（平均值）
2	18.3
3	29
4	47.2
5	71.1
6	119.1
7	174.6
8	257.3
9	350.7
10	441
11	513.3
12	594.8
13	629.4
14	640.8
15	655.1
16	655.9
17	659.6
18	661.8

任务：①计算K

②计算（K-N）/N与ln[（K-N）/N]

③计算a与r

④用逻辑斯蒂方程积分式计算拟合值

⑤将观察值与理论值进行叠合，区别

⑥逻辑斯蒂增长的不足_{（环境容纳量不一定不变/一定条件下环境压力对不同个体的影响不同/未考虑时滞/实际上低密度对种群密度也有制约/年龄结构不一定稳定/繁殖机会不均等）}

⑦种群数量达K后，能保持决定平衡吗？如不能，有哪些变化形式？_{（①无序变动②稳定周期变动③减幅变动④毁灭性变动）}

三、问题扩展

1、请设计草履虫食物泡移动路径的实验_{（放棉纤维固定草履虫，然后加番红或墨汁）}

2、请写出分离出单个草履虫的步骤和方法_{（①水和草履虫，连桥②凹玻片）}

3、草履虫在哪种条件下进行结合生殖_{（①环境条件变化②多次无性生殖后）}

实验十、种群增长——具有时滞的离散增长

零、前言

时滞：在时间上延后_{（环境、密度等等的改变对种群的影响不是立竿见影的）}

一、条件

t世代的种群增长要依赖（t-1）世代的种群

二、公式

N_t+1=[1-β（N_t-1-Neq）]·N_t

Neq：平衡常数，环境容纳量

β：直线斜率，平衡密度增加或减少的百分数，平均偏离平衡密度的百分数

三、数据

β=0.011，N₀=10，Neq=100

任务：①计算N₁~N₁₇（保留一位）_{PS：对于N1，Nt-1也是N0}

②绘时滞与无时滞的曲线图（趋势）

③说明时滞增长的特点（稳定周期性波动，6~7代一周期，密度对种群增长的影响延后，其指数增长期更加陡峭，超越与超补偿）

实验十二、群落的分类方法——群落的相似性（种间相关性）

零、前言

相关性/相似性只有正负之分。

一、相似性相关的计算公式

2×2列联表与关联系数计算（高中课内）

	+	-	∑
+	a	b
-	c	d
∑			P、N

①匹配系数c=2a/（2a+b+c）

②关联系数v，就是课内那个公式除以总数P再开根号

卡方检验X²：对，就是那个课内的公式

③df=1，准确来说是（2-1）×（2-1）=1计算得来的

查表：0.05-3.84/0.01-6.63

二、数据

	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13
样方1	1	1	0	1	1	0	0	1	0	1	1	0	0
样方2	0	1	1	0	1	1	0	0	1	0	1	1	1

任务：①列出列联表

②计算各系数

③计算卡方

④查表、确定

三、模拟实验

1、植物种子12种，坐标纸一张，请以此为材料设计两植物群落关联类型的调查实验

2、任务：

①实验设计_{（以坐标纸为栖息地/撒种子（先撒小的）/按照物种面积曲线法确定调查次数与最小面积/把物种随机撒开，划分样方A与B/确定种子的有和无）}

②种子名称

③计算

实验十三、物种多样性测定

零、前言（多样性水平3或4）

物种多样性：丰富度、均匀度、总多样性；α相当于丰富度与均匀度，β-变化率，γ指一个地理区域内

一、公式

1、物种数

Patrick，D=s

2、物种数+全部个体数

Marglef，D=（s-1）/lnN

3、物种数+全部个体数+每种个体数

辛普森指数：

①D₁=∑（Ni/N_总）²

②D₂=1-∑（Pi）²

4、相对密度+相对盖度+重要值+生物值

5、信息公式：物种数+全部个体数+每种个体数

香农维纳指数：

H=-∑（P_i·lnP_i）

二、数据（植物群落）

物种	1	2	3	4	5	6
个体数	3	15	1	1	10	2

任务：

计算各指数（区分两种辛普森指数的意义：多样性与D₁成负相关，与D₂成正相关）

三、问题

1、多样性指数的重要参数

2、物种多样性变化的基本规律是：海拔、纬度（两极例外）、海洋深度（PS：深海丰富度很高）

3、影响物种多样性变化的主要因素

实验十四、群落的分类与排序（一）_{聚合分类（最近邻接法,参考建进化树的邻接法）}

一、步骤

1、计算样方间相似系数_{（其实个人认为这应该叫相异指数，毕竟D与相似性成负相关，但貌似是一样的）}

D²jk=∑（x_ij-x_ik）²

2、列出矩阵

3、选出相异系数最小两个样方（A、B）合并为C'

4、计算样方组A+B与其他样方组间的距离

Dc（A+B）=min{DcA+DcB}_{举例：D1,3'=min{D1,3，D1,4}}

5、列出新矩阵

6、重复，直到合并为组

7、绘数状图

二、数据

参考树

	样方
种类	1	2	3	4	5	6
1	2	5	2	1	0	3
2	0	1	4	3	1	2
3	3	4	1	0	0	2

任务：建树

第四模块、遗传学

实验一、蝗虫精巢减数分裂制片与观察

1、细偶期

2、粗线期

3、双线期

4、终变期

5、精细胞与精子

6、不可名状物

7、减Ⅰ中期

实验二、畸变与正常蚕豆根尖的有丝分裂观察

1、微核

2、后期桥

3、落后染色体

4、多极

5、正常

6、意外收获

玉米